ÖLI-bilaga 15

Hoppa till: navigering, sök

Till innehĂ„llsförteckningen för Referensmetodik: Övre luftvĂ€gsinfektioner (ÖLI)


ÖLIbilaga15.jpg


Metod

  • 1. SmĂ€lt basmedium och överför till 50-55° vattenbad
  • 2. Blöt en filterpappersremsa med det utspĂ€dda difteriantitoxinet och lĂ„t det rinna av. LĂ€gg remsan lĂ€ngs diametern i en petriskĂ„l. Placera i 35-36° termostat och lĂ„t remsan torka ca 20 min. LĂ„t locket ligga pĂ„ glĂ€nt.
  • 3. TillsĂ€tt 3 mL serum till 15 mL Elek’s basmedium kylt till 50-55°C. (Om temperaturen Ă€r för hög konmer mediet att bli grumligt nĂ€r serat Ă€r tillsatt och resultatet blir dĂ„ svĂ„ravlĂ€st). Blanda ordentligt genom att rotera röret i hĂ€nderna sĂ„ att bubblor ej uppstĂ„r.
  • 4. HĂ€ll det lösta mediet i petriskĂ„len sĂ„ att filterremsan blirâ€Ă¶versvĂ€mmad”. Åtenplacera remsan lĂ€ngs diametern tex med en ögla.
  • 5. LĂ„t agarn stelna. Torka ytan genom att placera plattan i termostat med locket av högst 60 min,
  • 6. För att underlĂ€tta utstrykandet av stammar dras linjer i rĂ€t vinkel mot filterpappret i skĂ„lens botten. Linjerna bör vara 50 mm lĂ„nga och ungefĂ€r 10 mm frĂ„n varandra, PĂ„ varje platta kan 6 stammar testas.
  • 7. Stryk kontrollstammarna och de okĂ€nda stammarna lĂ€ngs linjerna vinkelrĂ€tt mot remsan, Placera den okĂ€nda stammen bredvid en toxinbildande kontrollstam sĂ„ att det bildas en precipitationsbĂ„ge om teststammen Ă€r positiv,
  • 8. VĂ€nd plattan och inkubera 18-24 tim, 35-36°C.

Tolkning av resultat

Leta efter precipitationslinjer som börjar ca 10 mm frÄn pappersremsan och som gÄr i 45° vinkel frÄn stryket.

JÀmför linjerna med den positiva kontrollens. Inkubera upp till 48 tim om inga linjer syns.

Den positiva kontrollens toxinlinje bör förena sig med toxinlinjen hos en positiv patientstam och bilda en rundad bÄge mellan de bÄda stammarna.

Om patientstammen producerar toxin lÄngsammare Àn den positiva kontrollstammen (svagt toxinbildande) blir precipitationsbÄgen spetsig i stÀllet för rundad.

Om patientstammen inte producerar toxin saknas precipitationslinje och toxinlinjen frÄn den positiva kontrollstammen gÄr tvÀrsigenom den utvuxna patientstammen. Den positiva kontrollstammen beter sig pÄ samma sÀtt mot den negativa kontrollstammen.

SekundÀra precipitationslinjer som beror pÄ andra lösliga antigen Àn difteritoxin bildas av bÄde toxinbildande och icke toxinbildande stammar.

Om positiv, svagt positiv och negativ kontrollstam finns pÄ plattan bör det inte vara nÄgon svÄrighet att identifiera de verkliga toxinlinjema, Det Àr en fördel att stryka den okÀnda stammen tvÄ gÄnger pÄ samma platta tex lÀge 2 och 6 (Fig 10).



ÖLIfigur10.jpg



Efter inkubering 48 tim kan ospecifika linjer upptrĂ€da pĂ„ litet avstĂ„nd frĂ„n antitoxinremsan och ibland bilda ‘bĂ„gar”. De Ă€r oftast blekare Ă€n de verkliga toxinlinjerna. Om det Ă€r nĂ„gra tveksamheter med linjernas specificitet mĂ„ste stammen testas pĂ„ marsvin.