2. Direktmikroskopi, svamp (Blankophor- och TuschfÀrgning)-svamp

Hoppa till: navigering, sök

Till innehÄllsförteckningen för Referensmetodik:Svampinfektioner


Bilaga 2

Direktmikroskopi, svamp

a. Blankophor/Calcofluor white fÀrgning

Preparation: Biopserad hud, hÄr och nagelmaterial sönderdelas med skalpell sÄ att smÄ tunna vÀvnadsfragment kan placeras pÄ ett objektglas. VÀvnadspreparat fÄr ligga 10 min eller över natten för bÀttre digerering. Ev. kan preparatet vÀrmas försiktigt för att bÀttre lösa upp nagelmaterial. Likvor, urin och andra tunna kroppsvÀtskor centrifugeras vid 1500xg 10 min. En droppe av sedimentet fÄr torka in pÄ objektglas och 1 droppe Blankophorlösning med lut tillsÀtts. TÀckglas lÀggs pÄ. Kan lÀsas omedelbart.

  • Blankophorlösning
    • Blankophor (B A Bayer)----- 20 mg
    • Aq. dest.----- 22,5 mL
    • 1 mol/L NaOH ----- 22,5 mL
    • Dimetylsulfoxid ----- 5 mL

Lösningen skyddas mot ljus och förvaras i rumstemperatur. Calcofluor white lösning finns kommersiellt tillgÀnglig frÄn t.ex BD.

Blankophor och Calcofluor white har exitationsvÄglÀngd 370-390 nm respektive 350 nm och emissionsvÄglÀngd 435-470 nm respektive 440 nm.

Blankophor+NaOH och Calcofluor white betraktas som den kĂ€nsligaste metoden men tillgĂ„ng till fluorescensmikroskop behövs för att kunna se de fluorescerande svampstrukturerna. Observera att dessa preparat Ă€ven kan betraktas i sĂ„vĂ€l ljusfĂ€lt - faskontrast - som mörkfĂ€ltsmikroskop. Strukturerna syns dĂ„ pĂ„ samma sĂ€tt som i ett KOH-preparat. KOH och NaOH anvĂ€nds för att provmaterialet skall “lösas” upp medan ev. svamp förblir intakt.

Preparaten kan screenas i förstoring x100. Strukturerna studeras mer noga i x250 och ev. x400. GÀller (i princip) för allt provmaterial, alla svampar och fÀrgningar.

Histopatologiska fÀrgningar för svamp, Grocott och PAS, kan göras pÄ vÀvnader. GramfÀrgning rekommenderas för fÀrgning av granulae vid mycetom. Studeras i x1000.

b. KOH-DMSO

Preparation: Materialet behandlas som i punkt a.

Reagens: 1) SÀtt 40 mL DMSO till 60 mL Aq. dest. och blanda vÀl. 2) VÀg upp 20 g KOH och lös i DMSO-vatten. 3) Förvara i lufttÀt flaska, t.ex. droppflaska.

Mikroskopi: AvlÀses i faskontrastmikroskop eller ljusmikroskop med x100-400. Artefakter i form av mosaikfenomen kan ses i hudprov.

c. Tusch

Denna fÀrgning anvÀnds endast för likvorprov för att diagnostisera kryptokockmeningit. PÄvisning av kryptokockantigen med latexagglutination Àr avsevÀrt kÀnsligare.

Preparation: Likvor centrifugeras 10 min vid 1500xg. En droppe sediment blandas med 1-2 1 ”L-öglor tusch pÄ ett objektglas.

Reagens: Finkornigt tusch, t.ex. Pelikan kan anvÀndas.

Mikroskopi: Ljusmikroskopi x250 eller x400 Àr lÀmplig. Typisk halo kan ses kring ev. knoppande jÀstceller = kryptokocker. OBS! Lyserade leukocyter kan förvÀxlas med kryptokocker!

d. LaktofenolbomullsblÄ eller metylenblÄfÀrgning för M. furfur m.m.

Preparation: DÄ material inkommit pÄ tejp pÄ objektglas kan tejpen lyftas och tryckas mot agaryta, medan en droppe fÀrglösning sÀtts pÄ glaset och tÀckglas lÀggs pÄ. Det gÄr Àven att sÀtta tejpen mot en droppe fÀrg pÄ ett objektglas.

Reagens: 1 % metylenblĂ„lösning, alt. lactophenol cotton blue.

Mikroskopi: Preparatet undersöks först med 10x objektiv och detaljgranskas sedan med 40x objektiv. Vid pityriasis versicolor ses Malassezia som blastokonidier i hopar (klasar) och korta, rÀtt tjocka hyfer.

e. För övriga fÀrgningar, som Grocott silver, PAS etc

HĂ€nvisas till klinisk patologi