3. Referenssubstrat-svamp

Hoppa till: navigering, sök

Till innehÄllsförteckningen för Referensmetodik:Svampinfektioner


Bilaga 3

Referenssubstrat-Svampdiagnostik

Inom mykologin anvÀnds ett stort antal olika substrat för att optimalt isolera och identifiera olika jÀstsvampar, dermatofyter, övriga mögel och dimorfa svampar. De hÀr angivna substraten utgör ett basalt urval men behöver ej ses som en bindande rekommendation. Varje svamplaboratorium har sina behov och kan föredra andra substrat. Recepten bifogas för att pÄ ett enkelt sÀtt vara tillgÀngliga och för att underlÀtta en standardisering inom landet. De flesta substraten finns beskrivna i Difco Manual.


HÄllbarhet för medier, allmÀnt

  • Plattor 4 veckor i förseglad plast
  • Rör med plasthatt 3 mĂ„n
  • Skruvlocksrör 6 mĂ„n


Arbutinagar

Indikation

  • Diagnostik av jĂ€stsvamp

Princip

  • Differentierande medium:
  • Mörkbrun utfĂ€llning bildas runt svampen i substratet beroende pĂ„ att arbutin hydrolyseras.

Medium/Substrat Arbutinagarbas 200 mL

  • IngĂ„ende komponenter:
    • Arbutin ----- 1 g
    • Agar No 1, Oxoid L 11 ----- 2,2 g
    • JĂ€stextrakt, Difco 0127 ----- 1,4 g
    • Ultrarent vatten ----- 200 mL
    • JĂ€rn(III)klorid, 10 %, sterilf. 1,3 mL


Beredning

  • 1. SmĂ€lt basagarn och temperera den till ca 50 °C.
  • 2. TillsĂ€tt jĂ€rnkloridlösningen.
  • 3. Gjut agarplattor, ca 20 mL per skĂ„l.


Assimilationsagar

Indikation

  • ArtbestĂ€mning av jĂ€stsvamp (kolhydratassimilation).

Princip

  • Differentierande medium: Mediet saknar kol- och energikĂ€lla i tillrĂ€cklig koncentration för att ge synlig vĂ€xt. Tillförsel av olika sockerarter kan fungera som kol- och energikĂ€lla, olika för olika sockerarter. VĂ€xten upptĂ€cks lĂ€ttare genom att sura produkter bildas, vilket Ă€ndrar pH-indikatorns fĂ€rg till gul.

Medium/Substrat KaliumdivÀtefosfat, KH2PO4, p.a. 1 g

  • IngĂ„ende komponenter:
    • Magnesiumsulfat, MgSO4 x 7 H2O, p.a.----- 0,5 g
    • Ammoniumsulfat, (NH4)2SO4, p.a.----- 5 g
    • Agar ----- 15 g
    • Bromkresolpurpur ----- 0,05 g
    • 1 mol/L NaOH, nyberedd ----- 0,05 mL
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL


pH 6,6 + 0,1 vid 25 °C


Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolv.
  • 2. Lös under omskakning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C.



Brain Heart Infusion (BHI)-agar

Indikation

  • Svampodling

Princip

  • Antibiotika för hĂ€mning av bakterier tillsĂ€tts efter behov. Blod (5 %) kan tillsĂ€ttas för dimorfa svampar med högre nĂ€ringskrav Ă€n ordinĂ€ra svampar.

Medium/Substrat

  • Brain Heart Infusion Agar, Difco ----- 26 g
  • Dest. vatten ultrarent ----- 500 mL

pH 7,4 ± 0,2

  • IngĂ„ende komponenter:
    • “Calf brains infusion” ----- 200 g
    • “Beef Heart infusion” ----- 250 g
    • Proteospepton ----- 10 g
    • Glukos ----- 2 g
    • Natriumklorid ----- 5 g
    • DinatriumvĂ€tefosfat ----- 2,5 g
    • Bacto Agar ----- 15 g


Beredning

  • 1. Lös med hjĂ€lp av vĂ€rme
  • 2. Autoklavera 120 °C i 20 min
  • 3. LĂ„t svalna till 50 °C


Brom Cresol Purpur Casein Glucose (BCPCG)-agar

Indikation

  • ArtbestĂ€mning av dermatofyter

Princip

  • 1) pH-förhöjning Ă€ndrar substratfĂ€rgen frĂ„n grĂ„blĂ„ till lila
  • 2) hydrolys av kasein ger uppklarning
  • 3) arttypiskt koloniutseende hos dermatofyter


  • 1.
    • Destillerat vatten ----- 500 mL
    • Skummjölkspulver ----- 40 g
    • Bromkresolpurpur, löst i 1,6 % etanol ----- 1 mL
  • 2.
    • Destillerat vatten ----- 100 mL
    • Glukos ----- 20 g
    • Kloramfenikol ----- 50 mg/L
    • Gentamicin ----- 20 mg/L


  • 3.
    • Destillerat vatten ----- 400 mL
    • Difco agar ----- 15 g


Beredning

  • 1 och 3 autoklaveras separat och blandas
  • 2 sterilfiltreras

pH Justeras till exakt 6,8

Chromagar

Indikation

  • Isolering och differentiering av jĂ€stsvampar.

Princip

  • Differentierande medium. Speciesspecifikt kromogent substrat (se Tabell 10).


Medium/Substrat CHROM-agar (CHROMagar Comp Paris; ILS Lab, Sverige) 47,5 g


  • IngĂ„ende komponenter:
    • Agar ----- 15 g
    • Pepton ----- 10 g
    • Kromogen blandning ----- 22 g
    • Kloramfenikol----- 0,5 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 6,3


Beredning

  • 1. Blanda pulver och vatten i kolv och lös under lĂ„ngsam omrörning medan agarn svĂ€ller.
  • 2. UppvĂ€rm till kokning. Omrörning och kokning igen flera gĂ„nger tills allt löst sig.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C
  • 4. Efter autoklaveringen, temperera agarlösningen till ca 50 °C.
  • 5. Gjut agarplattor, ca 20 mL per skĂ„l.


Corn meal agar (Majsmjölagar)

Indikation

  • För identifiering av mikromorfologi hos jĂ€stsvamp (se Tabell 10). Rött pigment hos Trichophyton rubrum.

Princip

  • Mediet Ă€r huvudsakligen tillverkat av infusion frĂ„n mald gul majs. Tween 80 (en oljesyraester) sĂ€nker ytspĂ€nningen och

ökar klamydokonidiebildningen hos Candida albicans. Bildning av pseudohyfer och hyfer i artkarakteristiska formationer.


Medium/Substrat Corn Meal Agar, Difco 0386 17 g

  • IngĂ„ende komponenter:
    • Infusion frĂ„n majsmjöl ----- 50 g
    • Agar ----- 15 g
    • Tween 80 -----10 mL
    • Glukos (endast vid dermatofytdiagnostik för pigmentbildning hos T. rubrum)----- 10 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C


Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolven.
  • 2. Lös genom omskakning och kokning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C

Dermatofyt test medium (DTM)

Indikation

  • För isolering och diagnostik av dermatofyter. (C. albicans vĂ€xer).

Princip

  • Sojapeptonet Ă€r en nĂ€ringskĂ€lla och glukos en energikĂ€lla. pH-indikatorn fenolrött anvĂ€nds för att pĂ„visa alkaliska produkter som bildats vid deaminering av aminosyror, varvid substratet Ă€ndrar fĂ€rg frĂ„n orange till rött. Cykloheximid hĂ€mmar saprofytiska svampar och nĂ„gra fĂ„ patogena arter sĂ„som Aspergillus och Fusarium. Kloramfenikol Ă€r ett bredspektrumantibiotikum som

hÀmmar mÄnga grampositiva och gramnegativa bakterier. Dermatofyter Àr inte kÀnsliga för dessa antibiotika.


Medium/Substrat Mycosel Agar, BBL 11462 36 g

  • IngĂ„ende komponenter
    • Sojabönsmjöl, papainbehandlat----- 10 g
    • Glukos----- 10 g
    • Agar ----- 15,5 g
    • Cykloheximid ----- 0,4 g
    • Kloramfenikol----- 0,05 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL
    • Fenolrött, 0,5 % ----- 40 mL
    • Gentamicinsulfat (löst i 2 mL ultrarent vatten) ----- 0,1 g


pH 5,5 + 0,2 vid 25 °C


Beredning

  • 1. Lös under omskakning och kokning.
  • 2. TillsĂ€tt gentamicin (aktiviteten bör ha kontrollerats).
  • 3. Autoklavera 7 min vid 121 °C.



Glukosblodagar

Indikation

  • För odling av framför allt jĂ€stsvamp

Princip

  • Rikt allmĂ€nt medium: Peptonerna tillför aminosyror och jĂ€stextraktet förser mediet med vitaminer, frĂ€mst frĂ„n B-gruppen. Tillsats av hĂ€stblod ger ytterligare tillvĂ€xtsubstanser. Glukostillsatsen Ă€r en lĂ€ttillgĂ€nglig kol- och energikĂ€lla.


Medium/Substrat Columbia II Agar Base, BBL 97596 360 g

  • IngĂ„ende komponenter (g/L)
    • Kasein, nedbrutet med pankreasenzymer ----- 11,5 g
    • DjurvĂ€vnad, behandlad med pepsin ----- 5,0 g
    • JĂ€stextrakt ----- 3,5 g
    • HjĂ€rtmuskel, behandlad med pankreasenzymer ----- 3,0 g
    • MajsstĂ€rkelse ----- 1,0 g
    • Natriumklorid ----- 5,0 g
    • Agar ----- 13,5 g
    • Glukos ----- 180 g
    • Ultrarent vatten ----- 9000 mL
    • HĂ€stblod, citratbehandlat ----- 600 mL

pH 7,3 ± 0,2


Beredning

  • 1. Blanda agarpulver, glukos och vatten i kastrullen och hĂ€ll blandningen i mediaberedaren
  • 2. Autoklavera 15 min vid 121°C
  • 3. Efter autoklavering temperera agarlösningen till ca 50 °C och tillsĂ€tt hĂ€stblod
  • 4. Vankomycin till 10 mg/L samt kloramfenikol till 0,5 mg/L
  • 5. Gjut agarplattor, ca 25 mL per skĂ„l


Glukosbuljong för anrikning av svamp

Indikation

  • Anrikningsmedium för bl.a. kryptokocker i likvor.

Princip

  • Köttextrakt och pepton innehĂ„ller kvĂ€ve; glukos Ă€r en kol- och energikĂ€lla. Natriumklorid tillför mediet salt.

Medium/Substrat Nutrient Broth No 2, Oxoid CM 67 25 g

  • IngĂ„ende komponenter
    • ÂŽLab LemcoÂŽ pulver ----- 10,0 g
    • Pepton ----- 10,0 g
    • Natriumklorid ----- 5,0 g
    • Glukos ----- 10 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 7,5 + 0,2 vid 25 °C


Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolven.
  • 2. Lös under omrörning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C



FÄgelfröagar

Indikation

  • Speciesdiagnostik av Cryptococcus neoformans.

Princip

  • Selektivt och differentierande medium: C. neoformans har förmĂ„ga att bilda fenoloxidas, vilket avslöjas som brunpigmentering av kolonierna.

Medium/Substrat Agar, Difco 15 g

  • IngĂ„ende komponenter
    • Glukos ----- 1 g
    • Kreatinin ----- 1 g
    • KaliumdivĂ€tefosfat, KH2PO4, p.a.----- 1 g
    • FĂ„gelfrö, Guizotia abyssinica frö ----- 50 g
    • Kloramfenikol----- 1 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL


Beredning

  • 1. Pulvrisera fĂ„gelfröna i mortel med 100 mL vatten
  • 2. HĂ€ll dem i kolv tillsammans med 1000 mL vatten och koka i ca 30 min
  • 3. Filtrera genom gasvĂ€v och mĂ€t upp volymen av extraktet till 1000 mL med vatten
  • 4. TillsĂ€tt övriga ingredienser till filtratet och lös dem genom kokning
  • 5. Autoklavera 15 min vid 121 °C

Efter autoklavering:

  • 6. Efter avsvalning till ca 50 °C tillsĂ€ttes kloramfenikol, som Ă€r löst i 5 mL alkohol



JÀsningsmedium för svamp med glukos m. fl. sockerarter

Indikation

  • ArtbestĂ€mning av jĂ€stsvamp (se Tabell 10)

Princip

  • Differentierande medium: JĂ€sning av glukos, galaktos, sackaros, maltos, laktos, trehalos, raffinos.
  • JĂ€sning, med synlig gasbildning. Vid gasbildning samlas denna upp i det inre upp- och nervĂ€nda durhamröret.

Medium/ Substrat Basbuljong

  • IngĂ„ende komponenter
    • JĂ€stextrakt, Difco 0127 ----- 14 g
    • Ultrarent vatten ----- 2800 mL
    • Glukos ----- 8 g/400 mL

pH 6,6 + 0,2 vid ca 25 °C


Beredning

  • 1. Blanda jĂ€stextrakt och vatten i kolven.
  • 2. Lös under omrörning.
  • 3. SĂ€tt 400 mL till 7 st kolvar.
  • 4. TillsĂ€tt glukos till 1 kolv innehĂ„llande 400 mL
  • 5. Spara de övriga portionerna till resterande sockerarter.
  • 6. Dispensera 3 mL/rör. AnvĂ€nd dispenseringsapparat.
  • 7. Autoklavera 30 min 100 °C (strömmande Ă„nga) 2 dagar i följd.


Kanavaninagar

Indikation

  • Differentiering av serotyper av Cryptococcus neoformans och Cryptococcus gattii.

Princip

  • Differentierande medium: Aminosyran kanavanin (basisk) samt pH-indikatorn bromtymolblĂ„tt Ă€r tillsatta i mediet. Kanavanin fungerar som substrat för C. gattii, varvid basiska produkter bildas, vilket höjer pH och mediet blir blĂ„tt vid serotyp B,C.

Medium/Substrat Basagar


  • IngĂ„ende komponenter
    • Agar, Difco 0140 ----- 2 g
    • BromtymolblĂ„tt ----- 4 mL
    • Ultrarent vatten ----- 86 mL
  • FĂ€rdigt medium:
    • Basagar, autoklaverad, flytande ----- 90 mL
    • Kanavaninlösning, sterilfiltrerad ----- 10 mL
  • IngĂ„ende komponenter
    • KaliumdivĂ€tefosfat ----- 10 g
    • Magnesiumsulfat ----- 10 g
    • Glycin ----- 100 g
    • Tiaminhydroklorid ----- 0,01 g
    • L-kanavanin ------ 0,3 g

pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C

Beredning av Basagar

  • 1. Blanda agar och vatten i kolv och lös under omskakning och kokning
  • 2. TillsĂ€tt bromtymolblĂ„tt och skaka om.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C

Efter autoklavering

  • 4. Efter autoklavering och dĂ„ mediet tempererats till ca 50 °C tillsĂ€ttes den likaledes tempererade kanavaninlösningen. Arbeta sterilt i sterilbĂ€nk.

Kaseinagar, vitaminfri och med tillsats av inositol och tiamin

Indikation

  • Testa dermatofyters vitaminberoende

Princip

  • Vitaminförsök.


Medium/Substrat

  • IngĂ„ende komponenter
    • Vitaminfritt kaseinhydrolysat, Difco ----- 1,25 g
    • KaliumdivĂ€tefosfat, KH2PO4, p.a. ----- 0,9 g
    • Magnesiumsulfat, MgSO4 x 7 H2O, p.a.----- 0,1 g
    • Glukos ----- 20 g
    • Agar, Difco 0140 ----- 10 g
    • Ultrarent vatten ----- 500 mL

Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolv.
  • 2. Lös under omskakning och uppkokning. Kontrollera att mediet inte fastnar pĂ„ kolvens botten under uppvĂ€rmningen.
  • 3. Autoklavera 15 min vid +121 °C.
  • 4. Dela satsen i tvĂ„ delar.
  • 5. Till en del av satsen sĂ€tts (sterilfiltrerad)
    • Inositol ----- 50 mg/L
    • Tiamin ----- 200 mg/L


Till den andra delen görs inga tillsatser



Littman oxgallaagar

Indikation

  • Differentialdiagnostik av dermatofyter.

Princip

  • Selektivt medium: Kristallviolett (bakteriostatiskt medel) hĂ€mmar bakterievĂ€xt.
  • Oxgalla hindrar spridning av svampkolonier.
  • Speciellt koloniutseende för olika dermatofyter.

Medium/Substrat Littman Oxgall Agar, Difco 0294 55 g

  • IngĂ„ende komponenter
    • Pepton ----- 10 g
    • Glukos ----- 10 g
    • Oxgalla ----- 15 g
    • Agar ----- 20 g
    • Kristallviolett ----- 0,01 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 7,0 + 0,2 vid 25 °C

  • Beredning
    • 1. Blanda pulver och vatten i kolven.
    • 2. Lös under omskakning och kokning. Kontrollera under uppvĂ€rmningen att mediet inte fastnar pĂ„ kolvens botten
    • 3. Autoklavera 15 min vid 121°C


Maltagar

Indikation

  • Makro- och mikromorfologi för jĂ€st- och mögelsvamp.

Princip

  • Text saknas

Medium/substrat

  • IngĂ„ende komponenter
    • Destillerat vatten ----- 1000 mL
    • Maltagar (Difco) ----- 45 g
  • IngĂ„ende komponenter i Maltagar (Difco):
    • Maltextrakt Difco ----- 30 g
    • Bacto Agar ----- 15 g

Löses med hjÀlp av vÀrme

OBS BrÀnner mycket lÀtt vid

pH 5,5 ± 0,2

Autoklaveras 20 min vid 120 °C.


Mycobioticagar

Indikation

  • För isolering av framför allt dermatofyter.

Princip

  • Selektivt medium: Cykloheximid hĂ€mmar saprofytisk svamp samt vissa patogena svampar
  • Kloramfenikol hĂ€mmar bakterier
  • Sojaton Ă€r ett enzymatiskt hydrolysat av sojabönsmjöl, vilket gynnar tillvĂ€xten av bl. a. svamp.

Medium/Substrat Mycobiotic Agar, Difco 0689 35,6 g

  • IngĂ„ende komponenter:
    • Sojaton ----- 10 g
    • Glukos ----- 10 g
    • Agar ----- 15 g
    • Cykloheximid ----- 0,05 g
    • Kloramfenikol ----- 0,05 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 6,5 + 0,2 vid 25 °C

  • Beredning
    • 1. Blanda pulver och vatten i kolven.
    • 2. Lös under omskakning och kokning.
    • 3. Autoklavera 10 min vid 121 °C


Modifierad kaliumnitritagar (MKA)

Indikation

  • För studium av jĂ€stsvampars assimilation av nitrat

Princip

  • Differentierande medium: Mediet innehĂ„ller nitrat som enda kvĂ€vekĂ€lla i tillrĂ€cklig koncentration för att ge synlig vĂ€xt.

Yeast Carbon Base innehÄller lÄga koncentrationer av aminosyror och vitaminer samt spÄrelement och salter. Positiva arter gör mediet basiskt och pH-indikatorn slÄr om till blÄgrönt-blÄtt.

Medium/Substrat

  • IngĂ„ende komponenter
    • Kaliumnitrat, KNO3, p.a.----- 0,7 g
    • Agar Noble, Difco 0142----- 8 g
    • BromtymolblĂ„tt----- 0,06 g
    • Yeast Carbon Base, Difco 0391 ----- 0,8 g
    • Ultrarent vatten ----- 500 mL

pH 5,9 - 6,0 vid ca 25 °C

Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolven.
  • 2. Lös genom omskakning och kokning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121°C.


Natriumtaurokolatagar

Indikation

  • Bildning av klamydokonidier hos Candida albicans och typiska pseudohyfarrangemang hos andra jĂ€starter.

Medium/Substrat

  • IngĂ„ende komponenter
    • Natrium-Taurokolat Merck ----- 10 g
    • Agar (granulerad BBL)----- 12 g
    • Destillerat vatten ----- 1000 mL

pH 7,5 ± 0,1

Steriliseras 15 min vid 120 °C


Potatisglukosagar

Indikation

  • Mikromorfologi hos svamp. Röd-beige fĂ€rg pĂ„ baksidan vid vĂ€xt av T. rubrum

Medium/substrat

  • IngĂ„ende komponenter
    • Potatisglukosagar (Difco 0013-01-4)----- 15,6 g
    • Destillerat vatten----- 400 mL

Beredning

  • Lös genom kokning.
  • Autoklavera 15 min vid 120 °C.

pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C



Rapid Assimilation Trehalose (RAT)-buljong

Indikation


Princip

  • PĂ„visa C. glabratas snabba trehalosassimilation.
  • Kemikalier Lösning 1:
    • Yeast Nitrogen Base -----
    • Difco 0392-15-9 ----- 134 mg
    • Ultrarent vatten ----- 10 mL
  • Lösning 2:
    • Trehalos, Sigma T-5251 ----- 4 g
    • Ultrarent vatten ----- 10 mL
  • Lösning 3:
    • Bromkresolgrönt, Merck 8121 ----- 8 mg
    • Etanol 95 % ----- 0,1 mL
    • Natriumhydroxid 0,01 mol/L ----- 0,6 mL
    • Ultrarent vatten ----- 9,3 mL
  • Lösning 4:
    • Cykloheximid, Sigma C-6255 ----- 10 mg
    • Ultrarent vatten ----- 1,0 mL


Beredning

  • Lösning 1:
    • VĂ€g upp substansen direkt i ett skruvlocksrör och tillsĂ€tt vattnet. Löses under försiktig uppvĂ€rmning och omblandning.
  • Lösning 2:
    • VĂ€g upp sockret direkt i ett skruvlocksrör och tillsĂ€tt vattnet. Löses genom omskakning. Lösningen kan sparas om den sterilfiltreras ned i ett sterilt rör i rumstemperatur.
  • Lösning 3:
    • VĂ€g upp fĂ€rgen direkt i ett skruvlocksrör och lös den i alkoholen. TillsĂ€tt NaOH och spĂ€d med vattnet. Lösningen kan sparas om den sterilfiltreras ned i ett sterilt rör i rumstemperatur.
  • Lösning 4:
    • VĂ€g upp cykloheximiden direkt i ett skruvlocksrör och lös den i vattnet.

Blanda samman i ett skruvlocksrör de fyra ovan beskrivna lösningarna enligt följande:

  • Lösning 1 8 mL
  • Lösning 2 1 mL
  • Lösning 3 1 mL
  • Lösning 4 40 mL

Kontrollera pH, som skall vara 5,4-5,5 och justera det eventuellt med en droppe NaOH 1 mol/L.

Sterilfiltrera mediet ned i ett sterilt skruvlocksrör.

Förvaring

  • RAT-medium: Rumstemperatur
  • Lösningarna 2 och 3: Rumstemperatur
  • Lösningarna 1 och 4 sparas inte.


HĂ„llbarhet

  • RAT-medium: 6 mĂ„nader
  • Lösningarna 2 och 3: 1 Ă„r

OBS! Cykloheximid Àr giftigt och bör hanteras enligt anvisningarna för arbete med farliga kemikalier.

Sabouraudagar med streptomycin och penicillin

Indikation

  • Odling av svamp frĂ„n bakteriekontaminerat prov.

Princip

  • Peptonet Ă€r mycket nĂ€ringsrikt. Glukostillsatsen samt det lĂ„ga pH-vĂ€rdet Ă€r ocksĂ„ gynnsamt för svampvĂ€xt.
  • Penicillin samt streptomycin inhiberar bakterievĂ€xt; svamp pĂ„verkas ej.

Medium/Substrat

  • IngĂ„ende komponenter
    • Glukos 4 ----- 0 g
    • Pepton ----- 10 g
    • Agar No 1----- 13,5 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

FÀrdig Sabouraudagarbas finns tillgÀnglig (Oxoid, Difco, BBL)

pH 5,6 ± 0,2 vid 25 °C

  • Penicillin G ----- 6 mg
  • Streptomycin ----- 12,5 mg

(lösta i 5 mL ultrarent vatten, steril)


Beredning

  • 1. Blanda glukos, pepton och agar med vattnet i kolven.
  • 2. Lös genom omskakning och kokning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C

Efter autoklavering

  • 4. Efter autoklavering och dĂ„ mediet tempererats till ca 50 °C tillsĂ€ttes antibiotikalösningen sterilt



Ureaagar

Indikation

  • PĂ„visa ureasaktivitet

Princip

  • Differentierande medium: Peptonet gynnar tillvĂ€xten av svamp. pH-indikatorn fenolrött visar alkalisk reaktion (rosaröd

fÀrg) dÄ urea p.g.a. ureasaktivitet omvandlas till ammoniak.

Medium/Substrat Basmedium:

  • IngĂ„ende komponenter
    • Mycological Peptone, Oxoid L 40----- 1 g
    • Glukos ----- 1 g
    • Natriumklorid, NaCl, p.a. ----- 5 g
    • DinatriumvĂ€tefosfat, Na2HPO4 x 2 H2O, p.a. ----- 1,5 g
    • KaliumdivĂ€tefosfat, KH2PO4, p.a. ----- 0,8 g
    • Fenolrött ----- 0,012 g
    • Agar No 3, Oxoid L 13 ----- 12 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 6,8 + 0,2 vid 25 °C


Slutlig blandning

  • Basmedium, autoklaverat ----- 200 mL
  • Urea, 40 %, sterilfitrerad ----- 10 mL/200 mL medium


Beredning

  • Basmedium
    • 1. Blanda alla ingredienser med vattnet i kolven.
    • 2. Lös genom omskakning och kokning.
    • 3. Autoklavera 15 min vid 121°C
  • Efter autoklavering
    • 4. Efter autoklavering eller smĂ€ltning och dĂ„ mediet tempererats till 50°C tillsĂ€ttes urealösningen sterilt.



Yeast Nitrogen Base (YNB)-agar med asparagin och glukos modifierad enligt Shadomy

Indikation

  • ResistensbestĂ€mning av jĂ€stsvamp med diskdiffusion.

Princip

  • Yeast Nitrogen Base (YNB) innehĂ„ller smĂ„ mĂ€ngder aminosyror, vitaminer och spĂ„relement dĂ„ vissa svampar saknar förmĂ„ga att syntetisera dessa. För att fĂ„ bĂ€ttre tillvĂ€xt vid resistensbestĂ€mning har tillsatts asparagin som en lĂ€ttillgĂ€nglig kvĂ€vekĂ€lla samt glukos som kol- och energikĂ€lla. Kloramfenikol hĂ€mmar bakterievĂ€xt.

Medium/Substrat

  • IngĂ„ende komponenter
    • Natriumfosfatbuffert, pH 7,0; 0,01 mol/L, autoklaverad (se recept nedan)----- 675 mL
    • Agar No 1 Oxoid L11 ----- 7.5 g
    • YNB-buljong 6,7 % sterilfiltrerad (se recept nedan)----- 75 mL
    • Kloramfenikol ----- 75 mg

pH 7,0+0,2 vid 25°C


Beredning

  • Lös agar i fosfatbuffert i en kolv genom skakning och kokning.
  • Autoklavera 15 min vid 121 °C
  • Temperera lösningen till 50 °C
  • TillsĂ€tt YNB-buljongen
  • TillsĂ€tt kloramfenikol
  • Gjut plattor 20-22 mL per skĂ„l.



Fosfatbuffert till YNB-agar pH 7,0

  • Ingredienser
    • NatriumdivĂ€tefosfat p.a. NaH2PO4xH2O ----- 0,43 g

DikaliumvÀtefosfat p.a. K2HPO4 ----- 0,85 g Destillerat/avjoniserat H2O till ----- 1000 mL


Beredning

  • Lös fosfaterna i nĂ€stan hela vattenmĂ€ngden under magnetomrörning.
  • Justera pH till 7,0 med syra eller bas
  • Justera slutvolymen med vatten och dispensera pĂ„ flaskor som autoklaveras 15 min 121 °C.

Förvaring Kyl 2-8°C, upp till 1 Är


YNB-buljong

  • Kemikalier
    • Yeast Nitrogen Base, Difco ----- 67 g
    • L-asparagin, p.a. ----- 15 g
    • Glukos, p.a. ----- 100 g

Destillerat/avjoniserat H2O upp till ----- 1000 mL


Beredning

  • VĂ€g upp substanserna i 1000 mL bĂ€gare och lös i ca 800 mL vatten med magnetomrörning.
  • HĂ€ll i mĂ€tkolven och justera med vatten till 1000 mL.
  • Sterilfiltrera (Ultrafilter 0,2 m, MediaKapÂź-5) direkt ned i sterila 100 mL flaskor.

Förvaring: Kyl 2-8 °C upp till 6 mÄnader.