Bilaga 1 (CNS)

Hoppa till: navigering, sök

Till innehÄllsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet


Bilaga 1

Detektion av bakterier i direktutstryk: GramfÀrgning

Reagens

InitialfÀrgning

  • Kristallviolett, stamlösning
    • Kristallviolett 100 g
    • (Merck art nr 15940)
    • Etanol 96 % 750 mL

VARNING! Etanol Àr brandfarligt.

  • Ammoniumoxalatlösning 1 %
    • Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi)
  • Kristallviolett brukslösning
    • Kristallviolett stamlösning 100 mL
    • Ammoniumoxalatlösning 1 % 500 mL
    • Renat vatten, ex dest. eller FRO 400 mL
    • (FRO=Filtered Reversed Osmosis)

Anvisning:

Brukslösningen filtreras genom filtrerpapper innan den anvÀnds.

Förvaring: Rumstempertaur


Fixering av utstryk

  • Lugol, brukslösning
    • Jodkristaller puriss 1 g
    • Kaliumjodid (pro analysi) 2 g
    • Renat vatten, ex dest. eller FRO 300 mL

Anvisning:

Lös jodkristallerna med kaliumjodiden i vatten.

Autoklaveras ej.

Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur

AvfÀrgning

  • Acetonsprit
    • Aceton (puriss) (KEBO art nr 2. 1015-1) 20 mL
    • Etanol (96 %) 80 mL

Förvaring: Rumstemperatur

Som alternativ kan ren etanol (96 %) anvĂ€ndas.

VARNING! Mycket brandfarligt.

KontrastfÀrg

  • Karbolfuchsin stamlösning
    • Basiskt fuchsin 8g
    • Etanol 90% 92 g
    • Fenol 90% 50 g
    • Renat vatten ad l000g

HĂ„llbarhet: 3 Ă„r

Karbolfuchsin, bruksiösning: 10 mL stamlösning blandas med 90 mL renat vatten.

Förvaring: Rumstemperatur

Fixering av utstryk

  • Lufttorka utstryket pĂ„ en plan yta.
  • Fixera över lĂ„ga.
  • Placera alternativt nĂ„gra droppar metanol pĂ„ objektglaset. LĂ„t ligga 2 min. LĂ„t kvarvarande metanol rinna av utan att skölja och lĂ„t utstryket lufttorka igen.

FĂ€rgningsprocedur

  • Flöda det fixerade preparatet med kristallviolettlösning. LĂ„t fĂ€rgen ligga kvar i 30 sek. HĂ€ll av kristallviolettlösningen. Skölj bort resterande lösning med Lugols lösning och flöda sedan med mer Lugols lösning. LĂ„t lösningen ligga kvar i 60 sek.
  • AvfĂ€rga genom att lĂ„ta acetonspriten flöda över utstryket medan objektglaset hĂ„lls i lutande vinkel. Sluta nĂ€r ingen mer fĂ€rg lossnar. Anpassa avfĂ€rgningen till tjockleken pĂ„ utstryket. Skölj försiktigt bort överflöd av spritenlacetonspriten med kranvatten.
  • KontrastfĂ€rga genom att hĂ€lla pĂ„ karbolfuchsin 15 sek. Skölj försiktigt bort kontrastfĂ€rgen med kranvatten. Torka objektglaset i stĂ„ende position eller anvĂ€nd en kommersiell objektglastorkare.