Bilaga 6 Mykobakterier; substrat-och reagensrecept

Hoppa till: navigering, sök

SekundÀrartikel till Tuberkulos-laboratoriediagnostik


Mykobakterier; substrat- och reagensrecept

Löwenstein-Jensen medium

(OBS! 3 tillverkningsdagar)

  • Dag 1
    • 1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan).
  • Dag 2
    • 1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar.
    • 2. Lutlösningen hĂ€lls över Ă€ggen (glasögon och handskar).
    • 3. Efter 3 timmar hĂ€lls lutlösningen av, varefter Ă€ggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar.
    • 4. Vattnet hĂ€lls av och Ă€ggen fĂ„r stĂ„ i kyl 4 ÂșC över natten.
  • Dag 3
    • 1. Äggen tas upp med sterila handskar och slĂ„s upp, ett i taget, i en steril bĂ€gare. Kontrollera att inget Ă€r skĂ€mt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL Ă€gglösning hĂ€lls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter.
    • 2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsĂ€tts.
    • 3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasvĂ€v (steril) och fĂ„r vila i 20-30 minuter.
    • 4. Dispenseras i sterila odlingsrör.
    • 5. Mediet koaguleras i vĂ€rmeskĂ„p 80-85 ÂșC 1 timme.


  • Lutlösning:
    • Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsĂ€tt
      • ≈ 100 mL lutpastiller NaOH, som fĂ„r lösa sig till följande dag.

OBS! Glasögon och handskar mÄste anvÀndas vid hanteringen av lutlösningen.

  • Saltlösning
    • Kalium-di-vĂ€tefosfat KH2PO4 ---- 3,2 g
    • Magnesiumfosfat MgSO4x7H2O ---- 0,32 g
    • Tri-Magnesium-dicitrat C12H10Mg3O14x14 H2O ---- 0,8 g
    • L-Aspargin ---- 4,8 g
    • Glycerol ---- 16,0 mL
    • 1 M HCl ---- 50,0 mL
    • Avjoniserat vatten ---- 700,0 mL
  • 1. Saltlösningen vĂ€gs upp i 1500 mL E-kolv.
  • 2. VĂ€rms till nĂ€stan kokpunkt.
  • 3. 40 g potatisstĂ€rkelse löses i 100 mL avjoniserat vatten.
  • 4. StĂ€rkelselösningen tillsĂ€tts under omskakning.
  • 5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ÂșC.
  • 6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur.


  • Malakitgrönt 2 % lösning
    • Malakitgrönt-oxalat ---- 3,0 g
    • Avjoniserat vatten ---- 150 mL
  • 1. Malakitgrönt-oxalat vĂ€gs upp i 300 mL glasflaska.
  • 2. Avjoniserat vatten tillsĂ€tts.
  • 3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten.
  • 4. Flaskan skakas dĂ„ och dĂ„ tills pulvret gĂ„tt i lösning.

Reagens för dekontaminering av prov

  • NALC och NaOH
    • A. 4% NaOH ----- 500 mL
    • B. 2.9 % natriumcitrat dihydrat eller 2.6 % vattenfri natriumcitrat ----- 500 mL
    • C. NALC (tillverka dagligen) ----- 5 g
    • D. pH 6,8 fosfatbuffert (eller sterilt destillerat vatten)

Blanda A och B, sterilisera och förvara för anvÀndning senare. TillsÀtt reagens C strax innan anvÀndning. Förbrukas inom 24 timmar.


  • Natriumlaurylsulfatlösning
    • Natrium laurylsulfat 99,9 % ---- 45 g
    • Avjoniserat vatten ---- 1500 mL
    • Natriumhydroxid, NaOH ---- 15 g

Laurylsulfatet löses i ca 60 ÂșC vatten, NaOH tillsĂ€tts innan utfĂ€llningen börjar. AnvĂ€nd mycket rena kĂ€rl. Fylls med ca 750 mL pĂ„ 1 liters flaskor och autoklaveras i 120 ÂșC i 20 min. StĂ€lls i 37 ÂșC termostat snarast.


  • Neutralisationslösning för dekontaminering
    • Svavelsyra H2SO4 konc. (98 %)---- 0,9 mL
    • Avjoniserat vatten ---- 1000 mL
    • Bromkresolpurpur 1 % ---- 0,8 mL

Blandas, fylles med ca 1000 mL pĂ„ 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 ÂșC i 20 minuter.

Reagens för fluorescensmikroskopi

  • Auramin
    • Auramin ---- 3,0 g
    • Fenol ---- 32 mL
    • H2O ---- 968 mL


  • Syra-alkohol lösning.
    • 3,0 mL koncentrerad HCl adderas lĂ„ngsamt till 97,0 mL 90-95 % etanol (stark vĂ€rme kan utvecklas).


Reagens för HallbergfÀrgning

  • Stamlösningar
    • Nachtblaulösning
    • Nachtblau ---- 5 g
      • 95 % alkohol ---- 100 mL
    • K2SO4-lösning K2SO4 ---- 4 g
      • Aq dest ---- 100 g
  • Brukslösningar
    • Nachtblaulösning, bruks
    • Aq dest ---- 405 mL
    • K2SO4 -lösning ---- 4,5 mL
    • Nachtblaulösning ---- 45 mL

Nachtblaulösning mĂ„ste efter hopblandningen upphettas till 75 Âș-80 ÂșC innan den anvĂ€nds.

  • Fuchsinlösning
    • Fuchsin ---- 1 g
    • (för kontrastfĂ€rgning) 70 % alkohol ---- 1000 mL


  • PANTA
    • Polymyxin B ---- 50 enheter/mL
    • Amfotericin ---- 5 mg/L
    • Nalixidinsyra ---- 20 mg/L
    • Trimetoprim ---- 5 mg/L
    • Azlocillin ---- 10 mg/L


FÀrdig lösning kan köpas frÄn Becton Dickinson.