Mycoplasma hominis/Ureaplasma species-laboratoriediagnostik

Hoppa till: navigering, sök

Huvudartikel: Ureaplasma species

Huvudartikel: Mycoplasma hominis

Se Àven Mycoplasma hominis/Ureaplasma; recept-bilaga4


D.7. Mycoplasma hominis/Ureaplasma species

AllmÀnt

BÄde Ureaplasma och M. hominis Àr förhÄllandevis lÀtta att pÄvisa med odling pÄ fasta eller i flytande substrat. De krÀver dock specialsubstrat för optimal vÀxt, och ingen av dem vÀxer signifikant pÄ traditionella mikrobiologiska substrat, inkluderande blododlingsflaskor. M. hominis kan ibland isoleras pÄ hematinagar eller blodagar. Organismerna kan isoleras i alla typer av odlingsprov, förutsatt att transporten till laboratoriet sker korrekt. För PCR-diagnostik (ej kommersiellt tillgÀnglig) anvÀnds huvudsakligen genen för 16S rRNA. Förutom 16S rRNA-genen anvÀnds vid diagnostiken av Ureaplasma Àven genen för ureas.

Referensmetodik

Metodik som Àr tillrÀckligt standardiserad för att förtjÀna beteckningen referensmetodik finns Ànnu ej definierad men en viss expertis kan erhÄllas frÄn Statens Serum Institut i Köpenhamn, Danmark.

Alternativa diagnostiska metoder

Odling

Odling Àr standardmetod för isolering av Ureaplasma species/M. hominis frÄn alla typer av kliniska prov.


Odlingssubstrat

Till anrikning av bakterierna anvÀnds initialt tvÄ flytande medier, ett för M. hominis och ett för Ureaplasma. Dessa har gjorts relativt selektiva för mÄlbakterierna genom tillsats av bensylpenicillin. VÀxt indikeras genom fÀrgomslag av indikatorn fenolrött och indikerar pH-förÀndring orsakad av metabolisering av arginin till ammoniak (M. hominis) och urea till ammoniak (Ureaplasma). Samma medier anvÀnds med agartillsats som fasta substrat efter anrikning i buljongerna (bilaga 4).


Isolering

Pinnproven frĂ„n uretra (mĂ€n) eller uretra/cervix inokuleras i vardera anrikningsbuljong som inkuberas i 36 +- 0,5 ÂșC. Buljongerna inspekteras dĂ€refter dagligen efter fĂ€rgomslag som indikerar vĂ€xt av nĂ„gon av organismerna. Positiv buljong sĂ„s dĂ€refter rikligt pĂ„ fast agarmedium (eventuellt sugs överflödig vĂ€tska bort efter ett dygn). Plattan inkuberas i 5-10 % CO2-miljö i 36 +- 0,5 ÂșC och inspekteras dagligen i upp till en vecka för kolonier med typisk morfologi. Mikroaerofil inkubation Ă€r optimal men ej nödvĂ€ndig.

Identifiering och minimikriterier

Kolonier av M. hominis vĂ€xer ut pĂ„ 2-6 dagar och Ă€r 200-300 ”m i diameter med ett typiskt och i det nĂ€rmaste specifikt ”stekt Ă€gg-utseende” (vĂ€xer nere i agarn centralt och pĂ„ ytan i periferin). VĂ€xt kan ocksĂ„ förekomma med diffusa kolonier nedgröpta i agarn. Ureaplasma vĂ€xer ut pĂ„ 1-4 dagar med mycket smĂ„ distinkta kolonier. Ureasproduktion kan pĂ„visas genom att droppa 1-2 droppar CaCl2-urea-lösning över plattan. MĂ„lbakterierna fĂ€rgas bruna inom 5 minuter.

Kolonimorfologi och metabolisering av arginin Àr inte tillrÀckligt för speciesidentifikation av M. hominis i prov frÄn luftvÀgar dÀr M. orale och M. salivarium ofta koloniserar och inte kan sÀrskiljas med dessa metoder.

NukleinsyrapÄvisning

Metoder validerade mot odling anvÀnds pÄ nÄgra laboratorier i landet och kan utföras pÄ olika typer av provmaterial. Vid önskemÄl om molekylÀrbiologisk pÄvisning av organismerna kontaktas lokalt mikrobiologiskt laboratorium.


Serologi

Ingen kommersiell metod finns tillgÀnglig.


ResistensbestÀmning

ResistensbestÀmning mot doxycyklin, josamycin, ofloxacin, erytromycin, tetracyklin, ciprofloxacin, azitromycin, klaritromycin och pristinamycin kan utföras och finns tillgÀnglig i diagnostiska kit. Denna metod Àr dock ganska grov.

Utförligare resistensbestÀming mot nÀmnda och Àven andra antibiotika Àr tillgÀnglig pÄ Statens Serum Institut i Köpenhamn dÀr en buljongspÀdningsmetod anvÀnds.

Epidemiologisk typning

Har ingen relevans i klinisk verksamhet. DNA typningssystem har utvecklats för forksningsÀndamÄl.


Kvalitetskontroll

Inga kommersiella externa ”quality assurance” (EQA) program finns tillgĂ€ngliga.


Svarsrutiner

VÀxt av M. hominis eller Ureaplasma species rapporteras semikvantitativt till kliniken (enstaka, sparsam, riklig vÀxt).


Laboratorierapportering

M. hominis eller Ureaplasma species Àr inte anmÀlningspliktiga.