PAR 06 Schistosoma Àgg i urin

Hoppa till: navigering, sök

Huvudartikel, publicerad mars 2012.


Till innehÄllsförteckngen för Referensmetodik:Parasitologisk diagnostik


Mikroskopisk pÄvisning av Schistosoma-Àgg i urin

Analysprincip

Urin filtreras (vid smÄ volymer klar urin), sedimenteras i kombination med filtrering eller centrifugering (stora volymer), eller endast centrifugeras (vid grumlig urin och/eller mycket smÄ volymer) för att erhÄlla ett sediment som granskas i ljusmikroskop med avseende pÄ förekomst av Schistosoma-Àgg (vanligen S. haematobium).

Schema: PĂ„visning av Schistosoma-Ă€gg i urin.

PĂ„visning av Schistosoma-Ă€gg i urin.

Speciell utrustning

  • ljusmikroskop med objektiv: 10x, 40x, samt med kalibrerat mĂ€tkular
  • membranfilter, porstorlek 12 mikrometer
  • filterhĂ„llare
  • koniskt mĂ€tglas (analysprocedur B)

Analysprocedur

A) Filtrering (anvĂ€nds vid mindre volymer – ”4 timmars urin” – och klar urin)

  1. BlötlĂ€gg ett membranfilter, med porstorlek 12 mikrometer, i en bĂ€gare med 0,9 % NaCl tillsammans med filterringen till en filterhĂ„llare.
  2. Montera filterhÄllare och filter: det vÄta filtret lÀggs pÄ underdelen av filterhÄllaren, ringen lÀggs ovanpÄ och sist skruvas överdelen pÄ. Kontrollera noga att filtret sitter rakt.
  3. MÀt urinmÀngden i ett mÀtglas. HÀll över urinen i en glasbÀgare.
  4. Dra upp urin i en 10–50 mL plastspruta och anslut sprutan till filterhĂ„llaren.
  5. Pressa urinen lÄngsamt genom filtret, som hÄlls över en slaskflaska.
  6. Demontera och fyll sprutan pÄ nytt och fortsÀtt tills all urin Àr filtrerad.
  7. Demontera och fyll sprutan med 10 mL 0,9 % NaCl och pressa igenom filtret.
  8. Demontera, fyll sprutan med ca 10 mL luft och pressa igenom filtret.
  9. Skruva isĂ€r filterhĂ„llaren. Flytta filtret med en pincett och lĂ€gg det upp och ned pĂ„ ett objektglas. TillsĂ€tt en droppe 0,9 % NaCl.
  10. TÀck med tÀckglas.

B) Sedimentering kombinerat med filtrering eller centrifugering (anvÀnds vid stora urinvolymer, som t.ex. hel dygnsmÀngd).

  1. MĂ€t urinvolymen.
  2. HÀll över urinen i ett koniskt mÀtglas.
  3. LĂ„t sedimentera 30–60 min.
  4. Sug försiktigt av supernatanten med vattensug utan att grumla upp bottensatsen. LÀmna ca 100 mL i botten.
  5. Filtrera bottensatsen enligt ovan (A) eller centrifugera enligt C vid mycket grumlig bottensats.

C) Centrifugering (görs nÀr urinen Àr mycket grumlig, t.ex. p.g.a. epitelceller eller blod, samt vid mycket smÄ urinvolymer)

  1. MĂ€t urinvolymen.
  2. Fördela den i 10 eller 50 mL rör beroende pÄ volymen.
  3. Centrifugera i 500 x g under 2 min.
  4. HĂ€ll av supernatanten.
  5. Droppa sedimentet pÄ objektsglas och lÀgg pÄ ett tÀckglas.

AvlÀsning

AvlÀsning efter filtrering (A) eller sedimentering kombinerat med filtrering (B)
  1. Undersök hela filtret i ljusmikroskop med 10x objektiv.
  2. BestÀm Schistosoma-art (se tabell i huvudartikel Schistosoma spp.). Alla arter har ett genomskinligt Àggskal och innehÄller ett miracidium. Tomma Àgg och fria miracidier kan förekomma.
  3. RÀkna eventuellt antalet Àgg. Notera i objektiv 40x om Àggen innehÄller (levande) miracidier. OBS! detta gÄr inte att bedöma om urinen blandats med konserveringsmedel.
AvlÀsning efter centrifugering (C) eller sedimentering kombinerat med centrifugering (B)
  1. LÀgg upp en droppe av sedimentet pÄ objektglas och tÀck med tÀckglas.
  2. Granska i ljusmikroskop med 10x objektiv.
  3. Gör flera upplÀgg tills hela sedimentet Àr undersökt.
  4. BestÀm Schistosoma-art (se tabell i huvudartikel Schistosoma spp.).
  5. RÀkna eventuellt antalet Àgg. Notera i objektiv 40x om Àggen innehÄller (levande) miracidier. OBS! detta gÄr inte att bedöma om urinen blandats med konserveringsmedel.
AnmÀrkning

Även S. mansoni-Ă€gg kan utsöndras i urin.

KvalitetssÀkring

Intern: För lÀmpligt bildmaterial se referens 4 och 5.

Extern: Schistosoma-Àgg ingÄr i UK-NEQAS:s utskick.

Svarsrutin

Negativt prov: Inga Àgg av Schistosoma spp. pÄvisade. X mL urin undersökt.

Positivt prov: Ägg av Schistosoma pĂ„visade (ange species). Antal Ă€gg/X mL urin. Levande/ej levande Ă€gg.

LitteraturhÀnvisningar

1. Braun-Munzinger RA. 1986. Quantitative egg counts in schistosomiasis surveys. Parasitology Today 2: 82-3

2. Dazo B, Bilas J. 1974. Two new field techniques for detection and counting of Schistosoma haematobium eggs in urine samples with an evaluation of both methods Bulletin of the World Health Organization 51: 399-408

3. Peters P, Mahmoud A, Warren K, Ouma J, Siongok T. 1976. Field studies of a rapid, accurate means of quantifying Schistosoma haematobium eggs in urine samples. Bulletin of the World Health Organization 54: 159-62.

4. WHO 1994. Bench Aids for the Diagnosis of Intestinal Parasites.

5. Ash L, Orihel T. Atlas of Human Parasitology. ASCP Press, Chicago.