PCR-baserade metoder, översikt

Hoppa till: navigering, sök

Till innehÄllsförteckningen för Referensmetodik:MolekylÀrbiologisk diagnostik


Konventionell PCR

För att pÄvisa amplifierad nukleinsyra anvÀndes inledningsvis agarosgelelektrofores för separation av nukleinsyran och infÀrgning av densamma med etidiumbromid som syns och kan fotograferas vid belysning med UV-ljus. Detta sÀtt att detektera nukleinsyran omnÀmns ofta som konventionell PCR och anvÀnds visserligen 2010 fortfarande, men realtids-PCR blir allt vanligare.

Reversed transkriptase PCR

RT-PCR stÄr för reversed transkriptase PCR. Tekniken anvÀnds nÀr templatet Àr RNA, till exempel nÀr viral arvsmassa, som ofta Àr RNA, ska detekteras och analyseras. PCR-analysen inleds dÄ med ett enzym som katalyserar polymerisering av fria nukleotider (dNTP) till dubbelstrÀngat DNA, med templat-RNA som mall. Enzymet Àr ofta en i E. coli klonad gen som kodar för Moloney Murine Leukemia Virus reverse transkriptase.

Nestad PCR

Nestad PCR Àr i princip detsamma som en dubbel PCR. Efter en inledande PCR anvÀnds en del av det amplifierade materialet som mall för ytterligare en PCR. Ett nytt primerpar, som basparar till ett omrÄde innanför det omrÄde som detekterats av PCR nummer ett, anvÀnds för denna andra PCR-reaktion. Detta Àr ett sÀtt att höja bÄde sensitivitet och specificitet.

Multiplex PCR

Multiplex PCR innebÀr samtidig detektion av flera olika mÄlsekvenser, dvs flera primerpar som basparar till olika agens eller templat anvÀnds samtidigt i samma reaktion. Detta innebÀr alltsÄ en samtidig detektion av flera agens eller mÄlsekvenser i ett rör. TyvÀrr sÀnks ofta sensitiviteten nÄgot vid denna typ av analys och höga krav stÀlls pÄ primrarnas utformning.

Realtids-PCR

Se separat artikel