Bilaga 1 (CNS) - Versionshistorik

Magnus Thore: /* Reagens */

2010-01-03T19:46:36Z

Reagens

Magnus Thore den 1 november 2009 kl. 07.06

2009-11-01T07:06:07Z

Magnus Thore: Skapade sidan med '''Till innehållsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet'' ---- == Bilaga 1 == === Detektion av bakterier i direktutstryk: Gramfärgning =…'

2009-10-31T17:13:13Z

Skapade sidan med '''Till innehållsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet'' ---- == Bilaga 1 == === Detektion av bakterier i direktutstryk: Gramfärgning =…'

Ny sida

''Till innehållsförteckningen för [[Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet]]''

----

== Bilaga 1 ==

=== Detektion av bakterier i direktutstryk: Gramfärgning ===

==== Reagens ====

'''Initialfärgning'''

*''Kristallviolett, stamlösning''
**Kristallviolett 100 g
**(Merck art nr 15940)
**Etanol 96 % 750 mL

'''VARNING'''! Etanol är brandfarligt.

*''Ammoniumoxalatlösning 1%''
**Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi)

Kristallviolett brukslösning
Kristallviolett stamlösning 100 mL
Ammoniumoxalatlösning 1% 500 mL
Renat vatten, ex dest. eller FRO 400 mL
(FRO=Filtered Reversed Osmosis)

Anvisning:
Brukslösningen filtreras genom filtrerpapper innan den används.
Förvaring: Rumstempertaur

Fixering av utstryk
Lugol, bruksiösning
Jodkristaller puriss 1 g
Kaliumjodid (pro analysi) 2 g
Renat vatten, ex dest. eller FRO 300 mL

Anvisning:
Lös jodkristallerna med kaliumjodiden i vatten.
Autoklaveras ej.
Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur
Avfärgning
Acetonsprit
Aceton (puriss) (KEBO art nr 2. 1015-1) 20 mL
Etanol (96%) 80 mL
Förvaring: Rumstemperatur
Som alternativ kan ren etanol (96%) användas.
VARNING! Mycket brandfarligt.

Kontrastfärg
Karbolfuchsin stamlösning
Basiskt fuchsin 8g
Etanol 90% 92 g
Fenol 90% 50 g
Renat vatten ad l000g
Hållbarhet: 3 år

Karbolfuchsin, bruksiösning: 10 mL stamlösning blandas med
90 mL renat vatten.
Förvaring: Rumstemperatur

Fixering av utstryk
* Lufttorka utstryket på en plan yta.
* Fixera över låga.
* Placera alternativt några droppar metanol på objektglaset. Låt ligga 2 min. Låt kvarvarande metanol rinna av utan att skölja och låt utstryket lufttorka igen.

Färgningsprocedur
* Flöda det fixerade preparatet med kristallviolettlösning. Låt färgen ligga kvar i 30 sek. Häll av kristallviolettlösningen. Skölj bort resterande lösning med Lugols lösning och flöda sedan med mer Lugols lösning. Låt lösningen ligga kvar i 60 sek.
* Avfärga genom att låta acetonspriten flöda över utstryket medan objektglaset hålls i lutande vinkel. Sluta när ingen mer färg lossnar. Anpassa avfärgningen till tjockleken på utstryket. Skölj försiktigt bort överflöd av spritenlacetonspriten med kranvatten.
* Kontrastfärga genom att hälla på karbolfuchsin 15 sek. Skölj försiktigt bort kontrastfärgen med kranvatten. Torka objektglaset i stående position eller använd en kommersiell objektglastorkare.

[[Kategori: CNS-infektioner]]

@@ Rad 20: / Rad 20: @@
 '''VARNING'''! Etanol är brandfarligt.
-*''Ammoniumoxalatlösning 1%''
+*''Ammoniumoxalatlösning 1 %''
 **Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi)

@@ Rad 23: / Rad 23: @@
 **Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi)
-Kristallviolett brukslösning
+*''Kristallviolett brukslösning''
-Kristallviolett stamlösning 		100 mL
+**Kristallviolett stamlösning 		100 mL
-Ammoniumoxalatlösning 1% 		500 mL
+**Ammoniumoxalatlösning 1 % 		500 mL
-Renat vatten, ex dest. eller FRO 		400 mL
+**Renat vatten, ex dest. eller FRO 		400 mL
-(FRO=Filtered Reversed Osmosis)
+**(FRO=Filtered Reversed Osmosis)
 Anvisning:
 Brukslösningen filtreras genom filtrerpapper innan den används.
 Förvaring: Rumstempertaur
 Fixering av utstryk
-Lugol, bruksiösning
+'''Fixering av utstryk'''
-Jodkristaller puriss 			1 g
+*''Lugol, brukslösning''
-Kaliumjodid (pro analysi) 			2 g
+**Jodkristaller puriss 			1 g
-Renat vatten, ex dest. eller FRO 		300 mL
+**Kaliumjodid (pro analysi) 			2 g
 Anvisning:
 Lös jodkristallerna med kaliumjodiden i vatten.
 Autoklaveras ej.
 Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur
-Avfärgning
+Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur
 Acetonsprit
-Aceton (puriss) (KEBO art nr 2. 1015-1)		 20 mL
+'''Avfärgning'''
-Etanol (96%)					80 mL
+*''Acetonsprit''
 Förvaring: Rumstemperatur
 Som alternativ kan ren etanol (96%) användas.
 VARNING! Mycket brandfarligt.
-Kontrastfärg
+'''Kontrastfärg'''
-Karbolfuchsin stamlösning
+*''Karbolfuchsin stamlösning''
-Basiskt fuchsin				8g
+**Basiskt fuchsin				8g
-Etanol 90%					92 g
+**Etanol 90%					92 g
-Fenol 90%					50 g
+**Fenol 90%					50 g
-Renat vatten 					ad l000g
+**Renat vatten 					ad l000g
 Hållbarhet: 3 år
-Karbolfuchsin, bruksiösning: 10 mL stamlösning blandas med
+''Karbolfuchsin, bruksiösning:'' 10 mL stamlösning blandas med
 mL renat vatten.
 Förvaring: Rumstemperatur
-Fixering av utstryk
+'''Fixering av utstryk'''
 * Lufttorka utstryket på en plan yta.
 * Fixera över låga.
 * Placera alternativt några droppar metanol på objektglaset. Låt ligga 2 min. Låt kvarvarande metanol rinna av utan att skölja och låt utstryket lufttorka igen.
-Färgningsprocedur
+'''Färgningsprocedur'''
 * Flöda det fixerade preparatet med kristallviolettlösning. Låt färgen ligga kvar i 30 sek. Häll av kristallviolettlösningen. Skölj bort resterande lösning med Lugols lösning och flöda sedan med mer Lugols lösning. Låt lösningen ligga kvar i 60 sek.
 * Avfärga genom att låta acetonspriten flöda över utstryket medan objektglaset hålls i lutande vinkel. Sluta när ingen mer färg lossnar. Anpassa avfärgningen till tjockleken på utstryket. Skölj försiktigt bort överflöd av spritenlacetonspriten med kranvatten.