Bilaga 6 (CNS) - Versionshistorik

Öjar Melefors: /* TBE: Bestämning av IgM-antikroppar med ELISA */

2014-01-13T12:20:12Z

TBE: Bestämning av IgM-antikroppar med ELISA

Magnus Thore: /* TBE: Bestämning av IgM-antikroppar med ELISA */

2009-12-19T12:21:27Z

TBE: Bestämning av IgM-antikroppar med ELISA

Magnus Thore den 6 december 2009 kl. 21.38

2009-12-06T21:38:47Z

Magnus Thore den 6 december 2009 kl. 20.36

2009-12-06T20:36:14Z

Magnus Thore: Skapade sidan med '''Till innehållsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet'' ---- == Bilaga 6 == === TBE: Bestämning av IgM-antikroppar med ELISA === Akt…'

2009-11-01T07:42:29Z

Skapade sidan med '''Till innehållsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet'' ---- == Bilaga 6 == === TBE: Bestämning av IgM-antikroppar med ELISA === Akt…'

Ny sida

''Till innehållsförteckningen för [[Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet]]''

----

== Bilaga 6 ==

=== TBE: Bestämning av IgM-antikroppar med ELISA ===

Aktuell infektion hos icke-TBE-vaccinerad individ diagnostiseras serologiskt genom påvisning av IgM anti-TBE-aktivitet i serum med iicapture ELISA. Antihumant 1M bundet till fast fas fångar IgM-antikroppsaktivitet i patientserum. TBE-specifik IgM-aktivitet indikeras med peroxidasmärkt renat TBE-virl santigen, följt av substratsteg.

'''Metod för detektion av IgM mot TBE-virus'''

'''μ-capture ELISA:''' Get-antihumant IgM (Cappel) spätt i coatingbuffert (0,05 mol/L karbonatbuffert pH 9,6) får binda till 96-hålsplattor av polystyren (Maxisorp, Nunc A/ över natt i rumstemperatur. Därefter kan plattorna förvaras i +4 oC tills de används. Plattorna tvättas med tvättbuffert (0,9 % NaC1 med 0,05 % tween) och eftercoatas med 5 % BSA i coatingbuffert i +37 °C 2 tim’: Eftercoatade plattor kan förvaras i +4 °C i upp till 4 dagar.

Serumprov, samt positivt och negativt kontrollserum, spädes 1:200, 1:2000 och 1:20000 i ELISA-buffert (EB; PBS med 0,5% BSA och 0,05% tween). Den eft2oat plattan tvättas med tvättbuffert och serumspädningarna sätts plattans brunnar, en brunn/spädning. Plattan inkuberas 1 tim +37 °C och tvättas. Peroxidasrnärkt TBE-antigen (Virologiska enheten, SMI) i ttitrerad spädning i EB sätts till alla brunnar med serumspädning, plattan inkuberas 2 tim +37 °C. Efter tvätt tillsätts substrat (1 mg/mL orthophenylendiamin i fosfat-citratbuffert pH 5,0 med 0,001 % H2O reaktionen stoppas efter 15 minuter med 2,5 mol/L H2S04 och absorb11 (OD) avläses vid 490 nm. Cut-off för positivt test är fastställt till OD 0,3.
[[Kategori: CNS-infektioner]]

@@ Rad 15: / Rad 15: @@
 '''μ-capture ELISA:''' Get-antihumant IgM (Cappel) spätt i coatingbuffert (0,05 mol/L karbonatbuffert pH 9,6) får binda till 96-hålsplattor av polystyren (Maxisorp, Nunc A, över natt i rumstemperatur. Därefter kan plattorna förvaras i +4 °C tills de används. Plattorna tvättas med tvättbuffert (0,9 % NaCl med 0,05 % tween) och eftercoatas med 5 % BSA i coatingbuffert i +37 °C 2 tim: Eftercoatade plattor kan förvaras i +4 °C i upp till 4 dagar.
-Serumprov, samt positivt och negativt kontrollserum, spädes 1:200, 1:2000 och 1:20000 i ELISA-buffert (EB; PBS med 0,5% BSA och 0,05% tween). Den eftercoatade plattan tvättas med tvättbuffert och serumspädningarna sätts plattans brunnar, en brunn/spädning. Plattan inkuberas 1 tim +37 °C och tvättas. Peroxidasrnärkt TBE-antigen (Virologiska enheten, SMI) i uttitrerad spädning i EB sätts till alla brunnar med serumspädning, plattan inkuberas 2 tim +37 °C. Efter tvätt tillsätts substrat (1 mg/mL orthophenylendiamin i fosfat-citratbuffert pH 5,0 med 0,001 % H<sub>2</sub>O reaktionen stoppas efter 15 minuter med 2,5 mol/L H<sub>2</sub>S0<sub>4</sub> och absorbansen (OD) avläses vid 490 nm. Cut-off för positivt test är fastställt till OD 0,3.
+Serumprov, samt positivt och negativt kontrollserum, spädes 1:200, 1:2000 och 1:20000 i ELISA-buffert (EB; PBS med 0,5% BSA och 0,05% tween). Den eftercoatade plattan tvättas med tvättbuffert och serumspädningarna sätts plattans brunnar, en brunn/spädning. Plattan inkuberas 1 tim +37 °C och tvättas. Peroxidasrnärkt TBE-antigen (Folkhälsomyndigheten) i uttitrerad spädning i EB sätts till alla brunnar med serumspädning, plattan inkuberas 2 tim +37 °C. Efter tvätt tillsätts substrat (1 mg/mL orthophenylendiamin i fosfat-citratbuffert pH 5,0 med 0,001 % H<sub>2</sub>O reaktionen stoppas efter 15 minuter med 2,5 mol/L H<sub>2</sub>S0<sub>4</sub> och absorbansen (OD) avläses vid 490 nm. Cut-off för positivt test är fastställt till OD 0,3.
 [[Kategori: CNS-infektioner]]

@@ Rad 8: / Rad 8: @@
 === TBE: Bestämning av IgM-antikroppar med ELISA ===
-Aktuell infektion hos icke-TBE-vaccinerad individ diagnostiseras serologiskt genom påvisning av IgM anti-TBE-aktivitet i serum med iicapture ELISA. Antihumant 1M bundet till fast fas fångar IgM-antikroppsaktivitet i patientserum. TBE-specifik IgM-aktivitet indikeras med peroxidasmärkt renat TBE-virl santigen, följt av substratsteg.
+Aktuell infektion hos icke-TBE-vaccinerad individ diagnostiseras serologiskt genom påvisning av IgM anti-TBE-aktivitet i serum med μ-capture ELISA. Antihumant IgM bundet till fast fas fångar IgM-antikroppsaktivitet i patientserum. TBE-specifik IgM-aktivitet indikeras med peroxidasmärkt renat TBE-virus antigen, följt av substratsteg.
 '''Metod för detektion av IgM mot TBE-virus'''
-'''μ-capture ELISA:''' Get-antihumant IgM (Cappel) spätt i coatingbuffert (0,05 mol/L karbonatbuffert pH 9,6) får binda till 96-hålsplattor av polystyren (Maxisorp, Nunc A/ över natt i rumstemperatur. Därefter kan plattorna förvaras i +4 °C tills de används. Plattorna tvättas med tvättbuffert (0,9 % NaC1 med 0,05 % tween) och eftercoatas med 5 % BSA i coatingbuffert i +37 °C 2 tim’: Eftercoatade plattor kan förvaras i +4 °C i upp till 4 dagar.
+'''μ-capture ELISA:''' Get-antihumant IgM (Cappel) spätt i coatingbuffert (0,05 mol/L karbonatbuffert pH 9,6) får binda till 96-hålsplattor av polystyren (Maxisorp, Nunc A, över natt i rumstemperatur. Därefter kan plattorna förvaras i +4 °C tills de används. Plattorna tvättas med tvättbuffert (0,9 % NaCl med 0,05 % tween) och eftercoatas med 5 % BSA i coatingbuffert i +37 °C 2 tim: Eftercoatade plattor kan förvaras i +4 °C i upp till 4 dagar.
-Serumprov, samt positivt och negativt kontrollserum, spädes 1:200, 1:2000 och 1:20000 i ELISA-buffert (EB; PBS med 0,5% BSA och 0,05% tween). Den eft2oat plattan tvättas med tvättbuffert och serumspädningarna sätts plattans brunnar, en brunn/spädning. Plattan inkuberas 1 tim +37 °C och tvättas. Peroxidasrnärkt TBE-antigen (Virologiska enheten, SMI) i ttitrerad spädning i EB sätts till alla brunnar med serumspädning, plattan inkuberas 2 tim +37 °C. Efter tvätt tillsätts substrat (1 mg/mL orthophenylendiamin i fosfat-citratbuffert pH 5,0 med 0,001 % H<sub>2</sub>O reaktionen stoppas efter 15 minuter med 2,5 mol/L H2S04 och absorb11 (OD) avläses vid 490 nm. Cut-off för positivt test är fastställt till OD 0,3.
+Serumprov, samt positivt och negativt kontrollserum, spädes 1:200, 1:2000 och 1:20000 i ELISA-buffert (EB; PBS med 0,5% BSA och 0,05% tween). Den eftercoatade plattan tvättas med tvättbuffert och serumspädningarna sätts plattans brunnar, en brunn/spädning. Plattan inkuberas 1 tim +37 °C och tvättas. Peroxidasrnärkt TBE-antigen (Virologiska enheten, SMI) i uttitrerad spädning i EB sätts till alla brunnar med serumspädning, plattan inkuberas 2 tim +37 °C. Efter tvätt tillsätts substrat (1 mg/mL orthophenylendiamin i fosfat-citratbuffert pH 5,0 med 0,001 % H<sub>2</sub>O reaktionen stoppas efter 15 minuter med 2,5 mol/L H<sub>2</sub>S0<sub>4</sub> och absorbansen (OD) avläses vid 490 nm. Cut-off för positivt test är fastställt till OD 0,3.
 [[Kategori: CNS-infektioner]]

@@ Rad 15: / Rad 15: @@
 '''μ-capture ELISA:''' Get-antihumant IgM (Cappel) spätt i coatingbuffert (0,05 mol/L karbonatbuffert pH 9,6) får binda till 96-hålsplattor av polystyren (Maxisorp, Nunc A/ över natt i rumstemperatur. Därefter kan plattorna förvaras i +4 °C tills de används. Plattorna tvättas med tvättbuffert (0,9 % NaC1 med 0,05 % tween) och eftercoatas med 5 % BSA i coatingbuffert i +37 °C 2 tim’: Eftercoatade plattor kan förvaras i +4 °C i upp till 4 dagar.
-Serumprov, samt positivt och negativt kontrollserum, spädes 1:200, 1:2000 och 1:20000 i ELISA-buffert (EB; PBS med 0,5% BSA och 0,05% tween). Den eft2oat plattan tvättas med tvättbuffert och serumspädningarna sätts plattans brunnar, en brunn/spädning. Plattan inkuberas 1 tim +37 °C och tvättas. Peroxidasrnärkt TBE-antigen (Virologiska enheten, SMI) i ttitrerad spädning i EB sätts till alla brunnar med serumspädning, plattan inkuberas 2 tim +37 °C. Efter tvätt tillsätts substrat (1 mg/mL orthophenylendiamin i fosfat-citratbuffert pH 5,0 med 0,001 % H2O reaktionen stoppas efter 15 minuter med 2,5 mol/L H2S04 och absorb11 (OD) avläses vid 490 nm. Cut-off för positivt test är fastställt till OD 0,3.
+Serumprov, samt positivt och negativt kontrollserum, spädes 1:200, 1:2000 och 1:20000 i ELISA-buffert (EB; PBS med 0,5% BSA och 0,05% tween). Den eft2oat plattan tvättas med tvättbuffert och serumspädningarna sätts plattans brunnar, en brunn/spädning. Plattan inkuberas 1 tim +37 °C och tvättas. Peroxidasrnärkt TBE-antigen (Virologiska enheten, SMI) i ttitrerad spädning i EB sätts till alla brunnar med serumspädning, plattan inkuberas 2 tim +37 °C. Efter tvätt tillsätts substrat (1 mg/mL orthophenylendiamin i fosfat-citratbuffert pH 5,0 med 0,001 % H<sub>2</sub>O reaktionen stoppas efter 15 minuter med 2,5 mol/L H2S04 och absorb11 (OD) avläses vid 490 nm. Cut-off för positivt test är fastställt till OD 0,3.
 [[Kategori: CNS-infektioner]]