Campylobacter-laboratoriediagnostik - Versionshistorik

Magnus Thore: /* Nukleinsyradetektion */

2012-04-29T10:21:30Z

Nukleinsyradetektion

Magnus Thore: /* Direktmikroskopi */

2012-04-29T10:20:25Z

Direktmikroskopi

Magnus Thore: /* Alternativ diagnostik */

2012-04-28T15:06:49Z

Alternativ diagnostik

Magnus Thore: /* Isolering */

2012-04-14T10:25:55Z

Isolering

Magnus Thore: /* Isolering av Campylobacter jejuni/coli */

2012-03-02T13:05:45Z

Isolering av Campylobacter jejuni/coli

Magnus Thore: /* Referenssubstrat */

2009-12-13T10:31:08Z

Referenssubstrat

Magnus Thore den 6 december 2009 kl. 22.20

2009-12-06T22:20:23Z

Magnus Thore den 6 december 2009 kl. 21.32

2009-12-06T21:32:03Z

Magnus Thore den 6 december 2009 kl. 20.19

2009-12-06T20:19:56Z

Magnus Thore den 6 december 2009 kl. 20.19

2009-12-06T20:19:21Z

@@ Rad 90: / Rad 90: @@
 Tack vare typisk morfologi kan ''Campylobacter'' identifieras i mikroskop på fecesmaterial från patienter med akut enterit. Förfarandet kan användas i utvalda fall där infektion med andra species än ''Campylobacter jejuni/coli'' misstänks.
 ====Nukleinsyradetektion====
-För direkt diagnostik av ''Campylobacter'' i feces med PCR saknas för närvarande tillräcklig erfarenhet, men skulle teoretiskt  kunna öka påvisande av andra arter av ''Campylobacter'' än ''C. jejuni/coli''.
+För direkt diagnostik av ''Campylobacter'' i feces med PCR saknas för närvarande tillräcklig erfarenhet, men skulle teoretiskt  kunna underlätta påvisandet av andra arter av ''Campylobacter'' än ''C. jejuni/coli''.
 Kommersiella metoder finns ej tillgängliga.
 [[Kategori:Laboratoriediagnostik-Infektioner i mage och tarm]]
 [[Kategori:Smittskyddslagens sjukdomar]]

@@ Rad 89: / Rad 89: @@
 ==== Direktmikroskopi ====
 Tack vare typisk morfologi kan ''Campylobacter'' identifieras i mikroskop på fecesmaterial från patienter med akut enterit. Förfarandet kan användas i utvalda fall där infektion med andra species än ''Campylobacter jejuni/coli'' misstänks.
-För direkt diagnostik av ''Campylobacter'' i feces med PCR saknas för närvarande tillräcklig erfarenhet.
+Kommersiella metoder finns ej tillgängliga.
 [[Kategori:Laboratoriediagnostik-Infektioner i mage och tarm]]

@@ Rad 68: / Rad 68: @@
 '''[[Fil:Fecesfigur13.jpg|center|450px|]]'''
-== Alternativ diagnostik ==
+== Övrig diagnostik ==
 Misstänkta kolonier verifieras rutinmässigt oftast genom mikroskopi, omspridning med och utan mikroaerofil miljö samt biokemiska test. Ofta utlämnas omspridning vid typiska fynd.

@@ Rad 57: / Rad 57: @@
 *''C. lari'' förväntas växa under samma betingelser som ''C. jejuni/coli''.
-Vid filtrering rekommenderas cellulosaacetat-membranfilter med 0,65 μm por-storlek. Filtret placeras på antibiotikafritt medium. 10-15 droppar fecessuspension placeras på filtret och plattan inkuberas i 37 °C en timme, varefter filtret tas bort och plattan reinkuberas i mikroaerofil miljö innehållande 7 % O<SUB>2</SUB>, 10 % CO<SUB>2</SUB> och 6 % vätgas balanse¬rat med N2 i 37 °C.
+Vid filtrering rekommenderas cellulosaacetat-membranfilter med 0,65 μm por-storlek. Filtret placeras på antibiotikafritt medium. 10-15 droppar fecessuspension placeras på filtret och plattan inkuberas i 37 °C en timme, varefter filtret tas bort och plattan reinkuberas i mikroaerofil miljö innehållande 7 % O<SUB>2</SUB>, 10 % CO<SUB>2</SUB> och 6 % vätgas balanserat med N<sub>2</sub> i 37 °C.
 Avläs efter 1 och 2 dygn
 == Identifiering och minimikriterier ==

@@ Rad 33: / Rad 33: @@
 ==== Isolering av ''Campylobacter jejuni/coli'' ====
-Provmaterial stryks ut på campylobacteragar och sekundärstryk görs med steril ögla. Inkubera plattan mikroaerofilt 42 °C i 2 dygn (optimal växt i en atmosfär som innehåller 7 % O<SUB>2</SUB> d.v.s. ca 1/3 av normal syrespänning och 10 % CO<SUB>2</SUB>, resten N2). Lämplig atmosfär kan uppnås genom att evakuera en anaerobklocka utan katalysator till 1/3 och ersätta med en koldioxid-kvävgas blandning eller med hjälp av kommersiella gasgenererande kits. En studie utförd vid lasarettet i Falun gav vid handen att fler ''Campylobacter'' isolerades med Anoxomatutrustning än med klockor och Campy Pak.
+Provmaterial stryks ut på campylobacteragar och sekundärstryk görs med steril ögla. Inkubera plattan mikroaerofilt 42 °C i 2 dygn (optimal växt i en atmosfär som innehåller 7 % O<SUB>2</SUB> d.v.s. ca 1/3 av normal syrespänning och 10 % CO<SUB>2</SUB>, resten N<SUB>2</SUB>). Lämplig atmosfär kan uppnås genom att evakuera en anaerobklocka utan katalysator till 1/3 och ersätta med en koldioxid-kvävgas blandning eller med hjälp av kommersiella gasgenererande kits. En studie utförd vid lasarettet i Falun gav vid handen att fler ''Campylobacter'' isolerades med Anoxomatutrustning än med klockor och Campy Pak.
 Avläsning sker efter 1 och 2 dygn.
 Misstänkta kolonier är vanligen genomskinliga, grå till metallglänsande; ibland med ett karakteristiskt utflytande/svärmande växtsätt och ibland små och toppiga. I de fall enskilda kolonier bildats har de ojämna och utflytande kanter.
 == Andra ''Campylobacter'' species ==

← Äldre version		Versionen från 13 december 2009 kl. 10.31
Rad 29:		Rad 29:


−	Blodfri selektiv campylobacteragar [[[Bilaga]] 1.~~1.8~~]. Substratets selektivitet beror på tillsats av antibiotika (cefoperazone 32 mg/L, amfotericin B 10 mg/L) och deoxycholat vilka hämmar de flesta grampositiva bakterier och även de flesta av tarmens gramnegativa bakterier. En tillsats av kristallviolett hämmar grampositiva bakterier och jäst. Substratet har validerats mot blodhaltig campylobacteragar och befunnits ge likvärdiga resultat till ett lägre pris. Andra antibiotikakombinationer innehållande cefalotin kan hämma ''Campylobacter'' och bör därför undvikas.	+	Blodfri selektiv campylobacteragar [[Bilaga 1. Bakteriologiska referenssubstrat]]. Substratets selektivitet beror på tillsats av antibiotika (cefoperazone 32 mg/L, amfotericin B 10 mg/L) och deoxycholat vilka hämmar de flesta grampositiva bakterier och även de flesta av tarmens gramnegativa bakterier. En tillsats av kristallviolett hämmar grampositiva bakterier och jäst. Substratet har validerats mot blodhaltig campylobacteragar och befunnits ge likvärdiga resultat till ett lägre pris. Andra antibiotikakombinationer innehållande cefalotin kan hämma ''Campylobacter'' och bör därför undvikas.Ursprungligt substrat enl. Skirrow beskrivs i [[Bilaga 1. Bakteriologiska referenssubstrat]].
−	Ursprungligt substrat enl. Skirrow beskrivs i [[Bilaga 1. Bakteriologiska referenssubstrat]].

	==== Isolering av ''Campylobacter jejuni/coli'' ====		==== Isolering av ''Campylobacter jejuni/coli'' ====

@@ Rad 13: / Rad 13: @@
 De ''Campylobacter''-arter som är vanligast hos människa växer bäst vid 42 °C i mikroaerofil miljö bestående av 3 %-15 % O<SUB>2</SUB> och 1-10 % CO<SUB>2</SUB>. Inga otvetydigt kostnadseffektiva anrikningsförfaranden har beskrivits.
-Vissa species som ''C. upsaliensis'' är känsliga för antibiotika som ingår i de selektiva medierna. För isolering av sådana förordas filtreringsmetodik. ''Campylobacter'' passerar genom filter med porstorlek 0,45-0,65 m, till skillnad från de flesta andra tarmbakterier.
+Vissa species som ''C. upsaliensis'' är känsliga för antibiotika som ingår i de selektiva medierna. För isolering av sådana förordas filtreringsmetodik. ''Campylobacter'' passerar genom filter med porstorlek 0,45-0,65 μm, till skillnad från de flesta andra tarmbakterier.
 Beskriven referensmetodik inriktas i första hand på diagnostik av ''C. jejuni/coli'' som är vanligast i Sverige.
@@ Rad 59: / Rad 59: @@
 *''C. lari'' förväntas växa under samma betingelser som ''C. jejuni/coli''.
-Vid filtrering rekommenderas cellulosaacetat-membranfilter med 0,65 m por-storlek. Filtret placeras på antibiotikafritt medium. 10-15 droppar fecessuspension placeras på filtret och plattan inkuberas i 37 °C en timme, varefter filtret tas bort och plattan reinkuberas i mikroaerofil miljö innehållande 7 % O<SUB>2</SUB>, 10 % CO<SUB>2</SUB> och 6 % vätgas balanse¬rat med N2 i 37 °C.
+Vid filtrering rekommenderas cellulosaacetat-membranfilter med 0,65 μm por-storlek. Filtret placeras på antibiotikafritt medium. 10-15 droppar fecessuspension placeras på filtret och plattan inkuberas i 37 °C en timme, varefter filtret tas bort och plattan reinkuberas i mikroaerofil miljö innehållande 7 % O<SUB>2</SUB>, 10 % CO<SUB>2</SUB> och 6 % vätgas balanse¬rat med N2 i 37 °C.
 Avläs efter 1 och 2 dygn

@@ Rad 34: / Rad 34: @@
 ==== Isolering av ''Campylobacter jejuni/coli'' ====
-Provmaterial stryks ut på campylobacteragar och sekundärstryk görs med steril ögla. Inkubera plattan mikroaerofilt 42 oC i 2 dygn (optimal växt i en atmosfär som innehåller 7 % O2 d.v.s. ca 1/3 av normal syrespänning och 10 % CO2, resten N2). Lämplig atmosfär kan uppnås genom att evakuera en anaerobklocka utan katalysator till 1/3 och ersätta med en koldioxid-kvävgas blandning eller med hjälp av kommersiella gasgenererande kits. En studie utförd vid lasarettet i Falun gav vid handen att fler ''Campylobacter'' isolerades med Anoxomatutrustning än med klockor och Campy Pak.
+Provmaterial stryks ut på campylobacteragar och sekundärstryk görs med steril ögla. Inkubera plattan mikroaerofilt 42 °C i 2 dygn (optimal växt i en atmosfär som innehåller 7 % O2 d.v.s. ca 1/3 av normal syrespänning och 10 % CO2, resten N2). Lämplig atmosfär kan uppnås genom att evakuera en anaerobklocka utan katalysator till 1/3 och ersätta med en koldioxid-kvävgas blandning eller med hjälp av kommersiella gasgenererande kits. En studie utförd vid lasarettet i Falun gav vid handen att fler ''Campylobacter'' isolerades med Anoxomatutrustning än med klockor och Campy Pak.
 Avläsning sker efter 1 och 2 dygn.

@@ Rad 11: / Rad 11: @@
 Eftersom ''Campylobacter'' växer långsammare än annan tarmflora krävs selektiva medier innehållande antibiotika.
-De ''Campylobacter''-arter som är vanligast hos människa växer bäst vid 42 oC i mikroaerofil miljö bestående av 3 %-15 % O2 och 1-10 % CO2. Inga otvetydigt kostnadseffektiva anrikningsförfaranden har beskrivits.
+De ''Campylobacter''-arter som är vanligast hos människa växer bäst vid 42 °C i mikroaerofil miljö bestående av 3 %-15 % O2 och 1-10 % CO2. Inga otvetydigt kostnadseffektiva anrikningsförfaranden har beskrivits.
 Vissa species som ''C. upsaliensis'' är känsliga för antibiotika som ingår i de selektiva medierna. För isolering av sådana förordas filtreringsmetodik. ''Campylobacter'' passerar genom filter med porstorlek 0,45-0,65 m, till skillnad från de flesta andra tarmbakterier.
@@ Rad 54: / Rad 54: @@
 ==== Isolering ====
-*''C. upsaliensis'' växer bra vid 42 oC men hämmas av antibiotika.
+*''C. upsaliensis'' växer bra vid 42 °C men hämmas av antibiotika.
-*''C. fetus'' växer dåligt vid 42 oC. Vid särskild misstanke odlas provet vid 37 C.
+*''C. fetus'' växer dåligt vid 42 °C. Vid särskild misstanke odlas provet vid 37 °C.
 *''C. hyointestinalis'' är beroende av H2 för växt.
 *''C. lari'' förväntas växa under samma betingelser som ''C. jejuni/coli''.
-Vid filtrering rekommenderas cellulosaacetat-membranfilter med 0,65 m por-storlek. Filtret placeras på antibiotikafritt medium. 10-15 droppar fecessuspension placeras på filtret och plattan inkuberas i 37 oC en timme, varefter filtret tas bort och plattan reinkuberas i mikroaerofil miljö innehållande 7 % O2, 10 % CO2 och 6 % vätgas balanse¬rat med N2 i 37 oC.
+Vid filtrering rekommenderas cellulosaacetat-membranfilter med 0,65 m por-storlek. Filtret placeras på antibiotikafritt medium. 10-15 droppar fecessuspension placeras på filtret och plattan inkuberas i 37 °C en timme, varefter filtret tas bort och plattan reinkuberas i mikroaerofil miljö innehållande 7 % O2, 10 % CO2 och 6 % vätgas balanse¬rat med N2 i 37 °C.
 Avläs efter 1 och 2 dygn
@@ Rad 78: / Rad 79: @@
 ''Campylobacter'' är gramnegativa, lätt böjda stavar med ”måsvingeutseende”. Stundtals kan de uppträda som kockoida eller korta stavar.
-Vid omodling på selektiv campylobacteragar i mikroaerofil miljö 42 oC resp. aerob miljö 42 oC förväntas ''Campylobacter'' växa endast på plattan som inkuberats i mikroaerofil miljö.
+Vid omodling på selektiv campylobacteragar i mikroaerofil miljö 42 °C resp. aerob miljö 42 °C förväntas ''Campylobacter'' växa endast på plattan som inkuberats i mikroaerofil miljö.
 ''Campylobacter'' är typiskt långsamt oxidaspositiva och katalaspositiva.
@@ Rad 86: / Rad 87: @@
 Det bör dock framhållas att ''C. lari'' i stort påminner om ''C. jejuni'' och ''C. coli'' och att ovan beskrivet protokoll inte utesluter ''C. lari'' speciellt vid negativt hippurattest.
-''Campylobacter jejuni'' och ''coli'' kan skiljas åt med hippurattest (positiv resp. negativ reaktion). Hippuratnegativa varianter av ''C. jejuni'' finns beskrivna men inga andra species än ''C. jejuni'' är hippuratpositiva varför specificiteten är hög. Hydrolys av natriumhippurat kan påvisas i rörtest ( ASM Manual of Clinical Microbiology 7th ed. p. 1668) eller med disk och tjockt inokulat. Påvisande av hipO (hippuricas) genen med PCR kan också användas.
+''Campylobacter jejuni'' och ''coli'' kan skiljas åt med hippurattest (positiv resp. negativ reaktion). Hippuratnegativa varianter av ''C. jejuni'' finns beskrivna men inga andra species än ''C. jejuni'' är hippuratpositiva varför specificiteten är hög. Hydrolys av natriumhippurat kan påvisas i rörtest ( ASM Manual of Clinical Microbiology 7th ed. p. 1668) eller med disk och tjockt inokulat. Påvisande av ''hipO'' (hippuricas) genen med PCR kan också användas.