Clostridium difficile-laboratoriediagnostik - Versionshistorik

Magnus Thore: /* Referensstam */

2013-03-19T13:40:02Z

Referensstam

Magnus Thore: /* Referenssubstrat */

2009-11-29T12:40:09Z

Referenssubstrat

Magnus Thore den 20 november 2009 kl. 11.46

2009-11-20T11:46:40Z

Magnus Thore: /* Identifiering och minimikriterier */

2009-11-12T11:49:48Z

Identifiering och minimikriterier

Magnus Thore: /* Identifiering och minimikriterier */

2009-11-12T11:49:29Z

Identifiering och minimikriterier

Magnus Thore: /* Omsättning av prov */

2009-11-12T11:48:47Z

Omsättning av prov

Magnus Thore: /* Identifiering och minimikriterier */

2009-11-12T11:48:04Z

Identifiering och minimikriterier

Magnus Thore: /* Referensmetodik */

2009-07-28T08:42:57Z

Referensmetodik

Magnus Thore: /* Felkällor */

2009-07-28T08:38:55Z

Felkällor

Magnus Thore den 28 juli 2009 kl. 08.19

2009-07-28T08:19:14Z

@@ Rad 116: / Rad 116: @@
 === Referensstam ===
-*''C. difficile'' ATCC 9689 används som internkontroll på CCFA-plattor, som jämförelse vid luppmikroskopi, som kontroll på den anaeroba miljön och som kontrollstam vid eventuell resistensbestämning.
+*''C. difficile'' CCUG 4938T används som internkontroll på CCFA-plattor, som jämförelse vid luppmikroskopi, som kontroll på den anaeroba miljön och som kontrollstam vid eventuell resistensbestämning.
 === Felkällor ===

@@ Rad 73: / Rad 73: @@
 === Referenssubstrat ===
-*CCFA (cykloserin-cefoxitin-fruktos agar, se [[Bilaga 1]].1.10), selektivt medium för primärodling.
+*CCFA (cykloserin-cefoxitin-fruktos agar, se [[Bilaga 1. Bakteriologiska referenssubstrat]]), selektivt medium för primärodling.
 *Oselektivt blodhaltigt medium till anaerobodling och isolering av ''C. difficile''.
 *Anaerob buljong för eventuell anrikning av pinnprov.
 === Isolering ===

@@ Rad 10: / Rad 10: @@
 Diagnostik av ''C. difficile''-medierad sjukdom omfattar i första hand påvisning av toxin i feces. Referensmetod för toxindetektion är påvisning av cytotoxin, toxin B, i cellkultur. Flertalet cellinjer kan användas. Vissa fibroblastlinjer, t.ex. HEL-celler, reagerar på bråkdelar av picogram av ''C. difficile''-cytotoxin. Följande indikationer för diagnostik är motiverade
-*Speciell misstanke på ''Clostridium difficile''-medierad diarré efter, eller i sam-band med antibiotikabehandling eller annan behandling som kan tänkas rubba tarmfloran.
+*Speciell misstanke på ''Clostridium difficile''-medierad diarré efter, eller i samband med antibiotikabehandling eller annan behandling som kan tänkas rubba tarmfloran.
 *Kontroll av behandlingseffekt efter behandlad ''C. difficile''-infektion.
 *Screening vid diarréutbrott på vårdavdelningar. Odling kan vara motiverad som komplement vid negativ toxintest men fortsatt klinisk misstanke vid epidemiologisk frågeställning.
@@ Rad 19: / Rad 19: @@
 Påvisning av ''Clostridium difficile'' cytotoxin B i cellkultur är referensmetod.
-*Semikvantitativ påvisning av ''Clostridium difficile'' cytotoxin i feces görs med hjälp av en för toxinet känslig cellinje, t.ex. humana embryonala lungfibroblas-ter (HEL). Specifikt neutraliserande ''C. difficile'' antitoxin används för verifiering.
+*Semikvantitativ påvisning av ''Clostridium difficile'' cytotoxin i feces görs med hjälp av en för toxinet känslig cellinje, t.ex. humana embryonala lungfibroblaster (HEL). Specifikt neutraliserande ''C. difficile'' antitoxin används för verifiering.
 *Analysprocedur se [[Bilaga 5. Clostridium difficile-cytotoxin;analysprocedur|Bilaga 5]]
@@ Rad 45: / Rad 45: @@
 === Påvisning av ''C. difficile'' toxin med Enzyme immunoassay (EIA) ===
-Under senare år har ett flertal kommersiella tester baserade på ELISA-teknik utvecklats med vilka enbart toxin A eller både toxin A och toxin B samtidigt kan detekteras.  Med kännedom om att toxin A-/B+ stammar förekommer kan tester som endast detekterar toxin A ej rekommenderas. Det har däremot diskuterats om tester som detekterar toxin A och toxin B samtidigt på sikt ska kunna anses som alternativ, eller ersätta, celltest som referensmetod.  Fördelen med EIA-tester är att de är snabba, svar kan erhållas inom 3 timmar efter det att prov om¬händertagits i laboratoriet. Nackdelen är framför allt att känsligheten är lägre jämfört med referensmetoden, vilket medför att en låg toxinhalt i ett prov ej kommer att kunna detekteras.
+Under senare år har ett flertal kommersiella tester baserade på ELISA-teknik utvecklats med vilka enbart toxin A eller både toxin A och toxin B samtidigt kan detekteras.  Med kännedom om att toxin A-/B+ stammar förekommer kan tester som endast detekterar toxin A ej rekommenderas. Det har däremot diskuterats om tester som detekterar toxin A och toxin B samtidigt på sikt ska kunna anses som alternativ, eller ersätta, celltest som referensmetod.  Fördelen med EIA-tester är att de är snabba, svar kan erhållas inom 3 timmar efter det att prov omhändertagits i laboratoriet. Nackdelen är framför allt att känsligheten är lägre jämfört med referensmetoden, vilket medför att en låg toxinhalt i ett prov ej kommer att kunna detekteras.
 Sensitivitet och specificitet för EIA-tester (toxin A + B) jämfört med referensmetoden varierar mellan 64 och 93 %, respektive 93 och 99 % med positiva prediktiva värden från 84 till 100 % och negativa prediktiva värden från 80 till 99 %.
@@ Rad 55: / Rad 55: @@
 Mikrotiterbrunnar med bottnar klädda med antikroppar riktade mot ''C. difficile'' toxin A och toxin B. Till brunnarna sätts spätt patientprov och monoklonala, enzymmärkta antikroppar riktade mot toxinerna A och B. Plattan inkuberas i värmeblock eller inkubator. Om toxinerna finns i provet bildas ett reaktivt komplex av toxin och enzymmärkta antikroppar. Efter tvättning tillsätts enzymsubstrat i form av ett färgämne och i närvaro av bundet enzym utvecklas färg i proportion till mängd bundna enzymmärkta antikroppar och därmed till mängden toxin. Stopplösning tillsätts och resultatet avläses på spektrofotometer.
-EIA-testerna är enkla att utföra, alla reagenser, mikroplattor och utförlig be-skrivning inkluderas i kit-lådan. Av erfarenhet kan dock några viktiga steg sär-skilt påpekas:
+EIA-testerna är enkla att utföra, alla reagenser, mikroplattor och utförlig beskrivning inkluderas i kit-lådan. Av erfarenhet kan dock några viktiga steg särskilt påpekas:
 *Provet ska - oavsett konsistens - blandas noggrant innan provsättning.
 *Botten på brunnarna får ej vidröras (skador i bottenbeklädningen resulterar i felaktigt absorbansvärde).
 *Inkuberingen med enzymkonjugat bör göras på skak (minimerar antalet gränsvärden och falskt positiva resultat och förkortar dessutom testtiden).
 *Inkuberingen med substrat ska göras i mörker.
-*Utför tvättningen noga enligt beskrivningen (för att undvika hög bakgrunds¬reaktion).
+*Utför tvättningen noga enligt beskrivningen (för att undvika hög bakgrundsreaktion).
@@ Rad 107: / Rad 107: @@
 *Minimikriterier för verifiering: Isolerad stam på oselektivt blodhaltigt medium har typisk kolonimorfologi och utpräglad hästdoft.
-Under UV-lampa kolonier fluorescerande i grönt (chartreuse). Gramfärgning visar grampositiva stavar med ovala subterminala sporer.
+Under UV-lampa fluorescer kolonier  i grönt (chartreuse). Gramfärgning visar grampositiva stavar med ovala subterminala sporer.
 Kontroll av toxinproduktion på gjorda isolat kan vara befogat.
@@ Rad 125: / Rad 125: @@
 *Lång transporttid.
 *Felaktig förvaring av provet (förvaring utan kylning före transport, under transport, eller i laboratoriet före analys).
-*Frysning av provet. Vid förvaring i fryskåp sker en närmast 100-faldig reduk¬tion av antalet viabla C. difficile-organismer.
+*Frysning av provet. Vid förvaring i fryskåp sker en närmast 100-faldig reduktion av antalet viabla ''C. difficile''-organismer.
 *Felaktigt odlingsförfarande (t.ex. otillräckligt anaerob miljö, för lång tid mellan utodling och inkubering).
 [[Kategori:Laboratoriediagnostik-Infektioner i mage och tarm]]

@@ Rad 98: / Rad 98: @@
 *Odlingen anses som korrekt utförd om ''C. difficile''-kontrollstammen växt.
-Om odlingen inkuberats i anaerobbox görs en preliminär avläsning efter inkube-ring över natt. Vid misstänkt växt av ''C. difficile'', eller om samtidig toxintest bedömts som positiv, tas plattan ut på laboratoriebänken och eventuella typiska kolonier isoleras till oselektivt blodhaltigt anaerob medium. Isolering inkuberas anaerobt över natt.
+Om odlingen inkuberats i anaerobbox görs en preliminär avläsning efter inkubering över natt. Vid misstänkt växt av ''C. difficile'', eller om samtidig toxintest bedömts som positiv, tas plattan ut på laboratoriebänken och eventuella typiska kolonier isoleras till oselektivt blodhaltigt anaerob medium. Isolering inkuberas anaerobt över natt.
 *Slutlig avläsning: Slutgiltig avläsning görs under luppmikroskop efter inkubering i minst 2 dygn. Om inga kolonier med typiskt utseende kan ses, bedöms odlingen som negativ.

@@ Rad 94: / Rad 94: @@
 *Presumtiv diagnos: Identifiering baseras på karakteristisk lukt, fluorescens och mikroskopisk och makroskopisk morfologi.
-*Preliminär avläsning: ''C. difficile''-odling avläses under luppmikroskop (x 6 - 10). På CCFA (och andra blodhaltiga medier) växer ''C. difficile'' med grågröna, ho-mogena och delvis ut¬flytande kolonier, ca 2 mm, efter inkubering över natt och ca 4 mm efter 2 dygns inkubering. På CCFA-platta har ''C. difficile'' viss häst¬doft, men doften kommer helt till sin rätt först på oselektivt blodhaltigt medium. Under UV-lampa fluorescerar kolonier av ''C. difficile'' grönt (chartreuse - det kan ta några sekunder innan fluorescensen uppträder). Även ''C. innocuum'' fluorescerar chartreuse, men koloniutseende och morfologi förhindrar förväxling.
+*Preliminär avläsning: ''C. difficile''-odling avläses under luppmikroskop (x 6 - 10). På CCFA (och andra blodhaltiga medier) växer ''C. difficile'' med grågröna, homogena och delvis utflytande kolonier, ca 2 mm, efter inkubering över natt och ca 4 mm efter 2 dygns inkubering. På CCFA-platta har ''C. difficile'' viss hästdoft, men doften kommer helt till sin rätt först på oselektivt blodhaltigt medium. Under UV-lampa fluorescerar kolonier av ''C. difficile'' grönt (chartreuse - det kan ta några sekunder innan fluorescensen uppträder). Även ''C. innocuum'' fluorescerar chartreuse, men koloniutseende och morfologi förhindrar förväxling.
 *Odlingen anses som korrekt utförd om ''C. difficile''-kontrollstammen växt.

@@ Rad 105: / Rad 105: @@
 Prov omsätts om odlingen är negativ men samtidig toxin-test positiv, eller om den anaeroba miljön inte fungerat tillfredsställande.
-*Minimikriterier för verifiering: Isolerad stam på oselektivt blodhaltigt me¬dium har typisk kolonimorfologi och utpräglad hästdoft.
+*Minimikriterier för verifiering: Isolerad stam på oselektivt blodhaltigt medium har typisk kolonimorfologi och utpräglad hästdoft.
-	Under UV-lampa kolonier fluorescerande chartreuse. Gramfärgning visar gram-positiva stavar med ovala subterminala sporer.
+Under UV-lampa kolonier fluorescerande i grönt (chartreuse). Gramfärgning visar grampositiva stavar med ovala subterminala sporer.
-	Kontroll av toxinproduktion på gjorda isolat kan vara befogat.
+Kontroll av toxinproduktion på gjorda isolat kan vara befogat.
 === Kvalitetskontroll ===

@@ Rad 17: / Rad 17: @@
 === Referensmetodik ===
-*Toxinbildning
+Påvisning av ''Clostridium difficile'' cytotoxin B i cellkultur är referensmetod.
-**Semikvantitativ påvisning av ''Clostridium difficile'' cytotoxin i feces görs med hjälp av en för toxinet känslig cellinje, t.ex. humana embryonala lungfibroblas-ter (HEL). Specifikt neutraliserande ''C. difficile'' antitoxin används för verifiering.
+*Semikvantitativ påvisning av ''Clostridium difficile'' cytotoxin i feces görs med hjälp av en för toxinet känslig cellinje, t.ex. humana embryonala lungfibroblas-ter (HEL). Specifikt neutraliserande ''C. difficile'' antitoxin används för verifiering.
 *Analysprocedur se [[Bilaga 5. Clostridium difficile-cytotoxin;analysprocedur|Bilaga 5]]
 ==== Omsättning av prov ====

← Äldre version		Versionen från 28 juli 2009 kl. 08.38
Rad 132:		Rad 132:
	*Felaktigt odlingsförfarande (t.ex. otillräckligt anaerob miljö, för lång tid mellan utodling och inkubering).		*Felaktigt odlingsförfarande (t.ex. otillräckligt anaerob miljö, för lång tid mellan utodling och inkubering).

−	[[Kategori:Infektioner i mage och tarm~~-laboratoriediagnostik~~]]	+	[[Kategori:Laboratoriediagnostik-Infektioner i mage och tarm]]

@@ Rad 1: / Rad 1: @@
-Huvudartikel: [[Clostridium difficile]]
+Huvudartikel: ''[[Clostridium difficile]]''
-Se också:
+Se också: ''[[Bilaga 5. Clostridium difficile-cytotoxin;analysprocedur]]''
 ----