Pneumocystis jiroveci-pneumoni (PCP) - Versionshistorik

Öjar Melefors: /* Alternativ diagnostik */

2014-01-13T12:56:11Z

Alternativ diagnostik

Öjar Melefors: /* Immunmorfologi – infärgning med monoklonal antikropp. */

2014-01-13T12:54:54Z

Immunmorfologi – infärgning med monoklonal antikropp.

Öjar Melefors: /* Immunmorfologi – infärgning med monoklonal antikropp. */

2014-01-13T12:54:05Z

Immunmorfologi – infärgning med monoklonal antikropp.

Öjar Melefors: /* Alternativ diagnostik */

2014-01-13T12:53:10Z

Alternativ diagnostik

Magnus Thore den 26 december 2009 kl. 22.08

2009-12-26T22:08:38Z

Magnus Thore: /* Alternativ diagnostik */

2009-12-13T15:05:15Z

Alternativ diagnostik

Magnus Thore: /* Epidemiologisk typning */

2009-12-13T15:04:44Z

Epidemiologisk typning

Magnus Thore: /* Resistensbestämning och resistensutveckling */

2009-12-13T15:04:09Z

Resistensbestämning och resistensutveckling

Magnus Thore den 25 november 2009 kl. 10.58

2009-11-25T10:58:37Z

Visa ändringar

Magnus Thore den 25 november 2009 kl. 10.24

2009-11-25T10:24:05Z

@@ Rad 80: / Rad 80: @@
 Ett antal PCR-baserade metoder för detektion av ''Pneumocystis'' har beskrivits som använder olika DNA-sekvenser för amplifiering, t.ex. mitokondriellt DNA som kodar för ribosomalt RNA (rRNA) eller MSG-(Major Surface Glycoprotein) DNA [Wakefield et al, 1991; Huang et al, 1999]. Studier av dessa metoder har påvisat en högre känslighet för detektion av ''P. jiroveci'' jämfört med histokemisk färgning och immunmorfologi i BAL och även i ickeinvasivt provmaterial. Den högre känsligheten hos PCR har inte bara medfört att ''P. jiroveci'' kan påvisas tidigt i kliniska infektioner utan också hos patienter som aldrig utvecklar PCP (upp till 20 % av fallen). Det senare tyder på en asymtomatisk kolonisering av vissa individer som kan agera som bärare av smittämnet/sjukdomen. Behandling av dessa patienter med en positiv PCR-reaktion i BAL eller inducerat sputum men med negativ immunmorfologi är en kontroversiell fråga men en uppföljning av dessa individer rekommenderas.
-Vid SMI används för närvarande för diagnostik en s.k. nested PCR-metod i två steg, baserad på amplifiering av den mitokondriella genen för den stora subenheten av rRNA. Alla prov oavsett begäran om PCR, analyseras på Folkhälsomyndgheten först med immunmorfologi. PCR-metoden används sedan som ett känsligare komplement. På provsvaret anges alltid att påvisning av ''P. jiroveci''-DNA med negativ immunmorfologi kan tyda på en begynnande klinisk PCP eller en temporär subklinisk kolonisation.
+Vid Folkhälsomyndigheten används för närvarande för diagnostik en s.k. nested PCR-metod i två steg, baserad på amplifiering av den mitokondriella genen för den stora subenheten av rRNA. Alla prov oavsett begäran om PCR, analyseras på Folkhälsomyndigheten först med immunmorfologi. PCR-metoden används sedan som ett känsligare komplement. På provsvaret anges alltid att påvisning av ''P. jiroveci''-DNA med negativ immunmorfologi kan tyda på en begynnande klinisk PCP eller en temporär subklinisk kolonisation.
 Utvecklingen av realtids-PCR under senare år har öppnat möjligheten att direkt kvantifiera ''P. jiroveci'' i kliniskt provmaterial. Detta gör det möjligt att mer objektivt skilja på asymtomatisk kolonisation och PCP.

@@ Rad 63: / Rad 63: @@
 Båda dessa kit innehåller direktkonjugerade monoklonala antikroppar som färgar in både trofozoit och cyststadium. Detaljerade instruktioner medföljer varje kit. Känsligheten för cystpåvisning är god men vissa svårigheter att känna igen trofozoiter föreligger och tillverkarna rekommenderar endast positivt svar vid cystpåvisning.
-Vid Folkhälsomyndgheten används en indirekt immunmorfologisk metod som innefattar flera olika steg och är arbets- och tidskrävande [Elvin et al, 1988]. Den har visat hög specificitet och sensitivitet jämfört med andra immunmorfologiska metoder. På grund av metodens komplexitet rekommenderar vi den ej som rutinmetod på mikrobiologiska laboratorier. Den rekommenderas dock som referensmetod för validering av andra metoder.
+Vid Folkhälsomyndigheten används en indirekt immunmorfologisk metod som innefattar flera olika steg och är arbets- och tidskrävande [Elvin et al, 1988]. Den har visat hög specificitet och sensitivitet jämfört med andra immunmorfologiska metoder. På grund av metodens komplexitet rekommenderar vi den ej som rutinmetod på mikrobiologiska laboratorier. Den rekommenderas dock som referensmetod för validering av andra metoder.
 === Resistensbestämning och resistensutveckling ===

@@ Rad 59: / Rad 59: @@
 ==== Immunmorfologi – infärgning med monoklonal antikropp. ====
-−
 Ett flertal kommersiella kit för immunmorfologisk diagnostik finns på marknaden. Meridian: MeriFluor® Pneumocystis artikelnr 250050. Biorad: Monofluo ''Pneumocystis carinii'' IFA Test kit art nr 32515.
 Båda dessa kit innehåller direktkonjugerade monoklonala antikroppar som färgar in både trofozoit och cyststadium. Detaljerade instruktioner medföljer varje kit. Känsligheten för cystpåvisning är god men vissa svårigheter att känna igen trofozoiter föreligger och tillverkarna rekommenderar endast positivt svar vid cystpåvisning.
-Vid SMI används en indirekt immunmorfologisk metod som innefattar flera olika steg och är arbets- och tidskrävande [Elvin et al, 1988]. Den har visat hög specificitet och sensitivitet jämfört med andra immunmorfologiska metoder. På grund av metodens komplexitet rekommenderar vi den ej som rutinmetod på mikrobiologiska laboratorier. Den rekommenderas dock som referensmetod för validering av andra metoder.
+Vid Folkhälsomyndgheten används en indirekt immunmorfologisk metod som innefattar flera olika steg och är arbets- och tidskrävande [Elvin et al, 1988]. Den har visat hög specificitet och sensitivitet jämfört med andra immunmorfologiska metoder. På grund av metodens komplexitet rekommenderar vi den ej som rutinmetod på mikrobiologiska laboratorier. Den rekommenderas dock som referensmetod för validering av andra metoder.
 === Resistensbestämning och resistensutveckling ===

@@ Rad 80: / Rad 80: @@
 Ett antal PCR-baserade metoder för detektion av ''Pneumocystis'' har beskrivits som använder olika DNA-sekvenser för amplifiering, t.ex. mitokondriellt DNA som kodar för ribosomalt RNA (rRNA) eller MSG-(Major Surface Glycoprotein) DNA [Wakefield et al, 1991; Huang et al, 1999]. Studier av dessa metoder har påvisat en högre känslighet för detektion av ''P. jiroveci'' jämfört med histokemisk färgning och immunmorfologi i BAL och även i ickeinvasivt provmaterial. Den högre känsligheten hos PCR har inte bara medfört att ''P. jiroveci'' kan påvisas tidigt i kliniska infektioner utan också hos patienter som aldrig utvecklar PCP (upp till 20 % av fallen). Det senare tyder på en asymtomatisk kolonisering av vissa individer som kan agera som bärare av smittämnet/sjukdomen. Behandling av dessa patienter med en positiv PCR-reaktion i BAL eller inducerat sputum men med negativ immunmorfologi är en kontroversiell fråga men en uppföljning av dessa individer rekommenderas.
-Vid SMI används för närvarande för diagnostik en s.k. nested PCR-metod i två steg, baserad på amplifiering av den mitokondriella genen för den stora subenheten av rRNA. Alla prov oavsett begäran om PCR, analyseras på SMI först med immunmorfologi. PCR-metoden används sedan som ett känsligare komplement. På provsvaret anges alltid att påvisning av ''P. jiroveci''-DNA med negativ immunmorfologi kan tyda på en begynnande klinisk PCP eller en temporär subklinisk kolonisation.
+Vid SMI används för närvarande för diagnostik en s.k. nested PCR-metod i två steg, baserad på amplifiering av den mitokondriella genen för den stora subenheten av rRNA. Alla prov oavsett begäran om PCR, analyseras på Folkhälsomyndgheten först med immunmorfologi. PCR-metoden används sedan som ett känsligare komplement. På provsvaret anges alltid att påvisning av ''P. jiroveci''-DNA med negativ immunmorfologi kan tyda på en begynnande klinisk PCP eller en temporär subklinisk kolonisation.
 Utvecklingen av realtids-PCR under senare år har öppnat möjligheten att direkt kvantifiera ''P. jiroveci'' i kliniskt provmaterial. Detta gör det möjligt att mer objektivt skilja på asymtomatisk kolonisation och PCP.
 '''Histokemiska metoder:''' Traditionellt har histokemiska färgningsmetoder använts för påvisning av ''Pneumocystis''. Dessa färgmetoder är relativt enkla och kräver ingen avancerad utrustning. De har dock låg känslighet jämfört med infärgning med monoklonal antikropp eller PCR.
-−
 '''Giemsafärgning''' Enkel och snabb metod med låg känslighet då endast trofozoiter och sporozoiterna inuti cystorna färgas. Kräver BAL av hög kvalitet och mycket erfaren avläsare.

← Äldre version		Versionen från 26 december 2009 kl. 22.08
Rad 1:		Rad 1:
		+	'''Huvudartikel'''
		+	----
		+
	Till innehållsförteckning för ''[[Referensmetodik: Nedre luftvägsinfektioner, 2:a upplagan 2005]]''		Till innehållsförteckning för ''[[Referensmetodik: Nedre luftvägsinfektioner, 2:a upplagan 2005]]''

@@ Rad 85: / Rad 85: @@
 '''Giemsafärgning''' Enkel och snabb metod med låg känslighet då endast trofozoiter och sporozoiterna inuti cystorna färgas. Kräver BAL av hög kvalitet och mycket erfaren avläsare.
-'''Toluidine blue O färgning''' Metod som endast färgar cystor. Problematisk eftersom andra svampar (främst Candida) också färgas in och kan vara svåra att differentiera från Pneumocystis [Gosey et al, 1985].
+'''Toluidine blue O färgning''' Metod som endast färgar cystor. Problematisk eftersom andra svampar (främst ''Candida'') också färgas in och kan vara svåra att differentiera från ''Pneumocystis'' [Gosey et al, 1985].
 '''Silverfärgning - Grocottfärgning''' Svampfärgningsmetod som används på patologilaboratorier [Grocott, 1955]. Begränsningar som vid Toluidine blue O färgning.
 '''Calcofluor white''' (Fungiflour, Polysciences Inc., Warrington, Pa) Färgar kitin i cystväggen [Stratton et al, 1991]. Kräver UV mikroskop.
 === Kvalitetskontroll ===

@@ Rad 68: / Rad 68: @@
 === Epidemiologisk typning ===
-Konventionella metoder som t.ex. serotypning har inte kunnat användas för att differentiera isolat av ''P. jiroveci''. All nuvarande typning är baserad på genetiska polymorfismer i ett flertal loci inkluderande mitokondriella rRNA-gener (mtSSU och mtLSU), ITS1 och ITS2 i det nukleära rDNA och, bland andra, aromlokuset. För närvarande tycks analys av ITS1-och ITS2-regionerna med fler än 70 olika identifierade genotyper vara mest informativt för att påvisa biovariation hos P. jiroveci [Lee et al, 1998].
+Konventionella metoder som t.ex. serotypning har inte kunnat användas för att differentiera isolat av ''P. jiroveci''. All nuvarande typning är baserad på genetiska polymorfismer i ett flertal loci inkluderande mitokondriella rRNA-gener (''mtSSU'' och ''mtLSU''), ITS1 och ITS2 i det nukleära rDNA och, bland andra, aromlokuset. För närvarande tycks analys av ITS1-och ITS2-regionerna med fler än 70 olika identifierade genotyper vara mest informativt för att påvisa biovariation hos ''P. jiroveci'' [Lee et al, 1998].
 === Alternativ diagnostik ===

@@ Rad 64: / Rad 64: @@
 === Resistensbestämning och resistensutveckling ===
-Sulfaderivat med antifolataktivitet har varit de viktigaste preparaten för terapi och profylax av PCP under de senaste 30 åren. Utveckling av resistens mot sulfa hos P. jiroveci har postulerats genom de specifika förändringar som har hittats i genen som kodar för dihydropteroatsyntas (DHPS) som är det enzym i folsyracykeln som inhiberas av sulfapreparat. Sulfaresistens som förorsakas av mutationer i dhps-genen är vanligt förekommande hos både patogena bakterier och protozoer. Mutationer som ger förändringar i kodon 55 och 57 i P. jirovecis dhps-gen kan korreleras med misslyckad profylax och behandling av PCP [Helweg-Larsen et al, 1999; Takahashi et al, 2000]. Antibiotikaresistens kan inte fastställas på konventionellt sätt eftersom det inte går att odla P. jiroveci in vitro.
+Sulfaderivat med antifolataktivitet har varit de viktigaste preparaten för terapi och profylax av PCP under de senaste 30 åren. Utveckling av resistens mot sulfa hos ''P. jiroveci'' har postulerats genom de specifika förändringar som har hittats i genen som kodar för dihydropteroatsyntas (DHPS) som är det enzym i folsyracykeln som inhiberas av sulfapreparat. Sulfaresistens som förorsakas av mutationer i ''dhps''-genen är vanligt förekommande hos både patogena bakterier och protozoer. Mutationer som ger förändringar i kodon 55 och 57 i ''P. jirovecis'' ''dhps''-gen kan korreleras med misslyckad profylax och behandling av PCP [Helweg-Larsen et al, 1999; Takahashi et al, 2000]. Antibiotikaresistens kan inte fastställas på konventionellt sätt eftersom det inte går att odla ''P. jiroveci'' in vitro.
 === Epidemiologisk typning ===

@@ Rad 7: / Rad 7: @@
-== Smittämnen ==
+=== Smittämnen ===
-''Pneumocystis jiroveci'' (tidigare ''P. carinii'') är en atypisk svamp som infekterar lungorna hos människa [Wakefield, 2002]. Molekylära studier har visat att det finns olika Pneumocystis-arter var och en infekterande en specifik mammalie¬värd-organism [Demanche et al, 2001]. Livscykeln hos Pneumocystis tillväxtstadier antas innehålla en asexuell form och en sexuell övergångsform. Alla kända tillväxt¬stadier återfinns i värdorganismens lungalveoler och inkluderar en amöboid mono¬nuklerad trofozoit, en precysta och en mogen cysta som innehåller intra-cystiska kroppar (sporer) som kan utvecklas till trofozoiter. En systematisk analys av livs¬cykeln har inte kunnat genomföras eftersom det inte är möjligt att odla organismen in vitro.
+''Pneumocystis jiroveci'' (tidigare ''P. carinii'') är en atypisk svamp som infekterar lungorna hos människa [Wakefield, 2002]. Molekylära studier har visat att det finns olika ''Pneumocystis''-arter var och en infekterande en specifik mammalievärd-organism [Demanche et al, 2001]. Livscykeln hos ''Pneumocystis'' tillväxtstadier antas innehålla en asexuell form och en sexuell övergångsform. Alla kända tillväxtstadier återfinns i värdorganismens lungalveoler och inkluderar en amöboid mononuklerad trofozoit, en precysta och en mogen cysta som innehåller intracystiska kroppar (sporer) som kan utvecklas till trofozoiter. En systematisk analys av livscykeln har inte kunnat genomföras eftersom det inte är möjligt att odla organismen in vitro.
 Patogenes och patofysiologi
-Patogenesmekanismerna för pneumocystos är inte kända. Förmodligen överförs smitta genom inhalation av cystor från omgivningen. Intracystiska kroppar utsöndras sedan i lungalveolerna där de utvecklas till trofozoiter som selektivt binder till typ I pneumocyter. Denna kolonisation av alveolärt endotel leder till en reducerad halt av protein med ytspänningsnedsättande egenskaper och till för-ändringar i den lokala cellpopulationen inklusive en reduktion av antalet alveolära makrofager, nekros av typ I pneumocyter och tillväxt av typ II pneumo¬cyter. Ytterligare konsekvenser av framskriden infektion är skador på den alveokapillära barriären, pulmonärt ödem samt grava störningar av gasutbytet i lungorna.
+=== Patogenes och patofysiologi ===
 Symtom och klinisk bild (pneumoni)
-P. jiroveci-infektioner, även kallade pneumocystoser, manifesterar sig i tre olika kliniska varianter: 1) den infantila eller interstitiella plasmacellspneumonin som återfinns främst hos prematurt födda eller undernärda barn. 2) pneumoni hos individer med nedsatt immunförsvar som t.ex. AIDS-patienter, transplantations-patienter eller patienter som genomgår kemoterapi. 3) en sällan förekommande extrapulmonell eller disseminerad form.
+Patogenesmekanismerna för pneumocystos är inte kända. Förmodligen överförs smitta genom inhalation av cystor från omgivningen. Intracystiska kroppar utsöndras sedan i lungalveolerna där de utvecklas till trofozoiter som selektivt binder till typ I pneumocyter. Denna kolonisation av alveolärt endotel leder till en reducerad halt av protein med ytspänningsnedsättande egenskaper och till förändringar i den lokala cellpopulationen inklusive en reduktion av antalet alveolära makrofager, nekros av typ I pneumocyter och tillväxt av typ II pneumocyter. Ytterligare konsekvenser av framskriden infektion är skador på den alveokapillära barriären, pulmonärt ödem samt grava störningar av gasutbytet i lungorna.
 Subklinisk kolonisation av lungalveoler är vanligt förekommande.
 Typiska symtom innefattar torrhosta, feber, viktminskning, frossa, bröstsmärta, progressiv dyspne och cyanos. Även om sjukdomsförloppet kan vara snabbt utvecklas symtomen normalt gradvis och kan förekomma flera månader innan diagnosen kan fastställas. Radiologiskt karakteriseras Pneumocystis-pneumoni (PCP) av bilaterala diffusa eller interstitiella infiltrat som kan liknas vid “krossat glas”. Det är mycket ovanligt att P. jiroveci-infektioner ger extrapulmonära manifestationer.