Skillnad mellan versioner av "3. Referenssubstrat-svamp"

Från Referensmetodik för laboratoriediagnostik
Hoppa till navigering Hoppa till sök
 
(9 mellanliggande sidversioner av en annan användare visas inte)
Rad 347: Rad 347:
  
 
'''Indikation '''
 
'''Indikation '''
−
*Artbestämning av jästsvamp (se Tabell 10, sid 93)  
+
*Artbestämning av jästsvamp (se [[Identifiering-Jäst, tabellarisk översikt|Tabell 10]])  
  
−
Princip  Differentierande medium: Jäsning av glukos, galaktos,  
+
'''Princip'''
−
sackaros, maltos, laktos, trehalos, raffinos.  
+
*Differentierande medium: Jäsning av glukos, galaktos, sackaros, maltos, laktos, trehalos, raffinos.  
−
Jäsning, med synlig gasbildning.  
+
*Jäsning, med synlig gasbildning. Vid gasbildning samlas denna upp i det inre upp- och nervända durhamröret.  
−
Vid gasbildning samlas denna upp i det inre upp- och  
 
−
nervända durhamröret.  
 
  
−
Medium/ Basbuljong  
+
'''Medium/ Substrat Basbuljong'''
−
Substrat
+
 
−
Jästextrakt, Difco 0127 14 g  
+
*Ingående komponenter
−
Ultrarent vatten 2800 mL  
+
**Jästextrakt, Difco 0127 ----- 14 g  
−
Glukos 8 g/400 mL  
+
**Ultrarent vatten ----- 2800 mL  
 +
**Glukos ----- 8 g/400 mL  
  
 
pH 6,6 + 0,2 vid ca 25 °C  
 
pH 6,6 + 0,2 vid ca 25 °C  
  
−
Beredning 1. Blanda jästextrakt och vatten i kolven.  
+
 
−
2. Lös under omrörning.  
+
'''Beredning'''
−
3. Sätt 400 mL till 7 st kolvar.  
+
*1. Blanda jästextrakt och vatten i kolven.  
−
4. Tillsätt glukos till 1 kolv innehållande 400 mL  
+
*2. Lös under omrörning.  
−
5. Spara de övriga portionerna till resterande  
+
*3. Sätt 400 mL till 7 st kolvar.  
−
sockerarter.  
+
*4. Tillsätt glukos till 1 kolv innehållande 400 mL  
−
6. Dispensera 3 mL/rör. Använd dispenseringsapparat.  
+
*5. Spara de övriga portionerna till resterande sockerarter.  
−
7. Autoklavera 30 min 100 °C (strömmande ånga)  
+
*6. Dispensera 3 mL/rör. Använd dispenseringsapparat.  
−
2 dagar i följd.  
+
*7. Autoklavera 30 min 100 °C (strömmande ånga) 2 dagar i följd.  
−
138
+
  
  
−
+
=== Kanavaninagar ===
  
−
Bilaga 3:12
 
−
KANAVANINAGAR
 
  
−
Indikation Differentiering av serotyper av Cryptococcus  
+
'''Indikation'''
−
neoformans.  
+
*Differentiering av serotyper av ''Cryptococcus neoformans'' och ''Cryptococcus gattii''.  
  
−
Princip Differentierande medium:  
+
'''Princip '''
−
Aminosyran kanavanin (basisk) samt pH-indikatorn  
+
*Differentierande medium: Aminosyran kanavanin (basisk) samt pH-indikatorn bromtymolblått är tillsatta i mediet. Kanavanin fungerar som substrat för ''C. gattii'', varvid basiska produkter bildas, vilket höjer pH och mediet blir blått vid serotyp B,C.  
−
bromtymolblått är tillsatta i mediet. Kanavanin fungerar  
 
−
som substrat för C. neoformans, varvid basiska  
 
−
produkter bildas, vilket höjer pH och mediet blir blått vid  
 
−
serotyp B,C.  
 
  
−
Medium/  
+
'''Medium/Substrat     Basagar'''
−
Substrat Basagar:
 
−
Agar, Difco 0140 2 g
 
−
Bromtymolblått 4 mL
 
−
Ultrarent vatten 86 mL
 
  
−
Färdigt medium:
 
−
Basagar, autoklaverad, flytande 90 mL
 
−
Kanavaninlösning, sterilf. 10 mL
 
  
−
Ingående komponenter:
+
*Ingående komponenter
−
Kaliumdivätefosfat 10 g  
+
**Agar, Difco 0140 ----- 2 g
−
Magnesiumsulfat 10 g
+
**Bromtymolblått ----- 4 mL
−
Glycin 100 g
+
**Ultrarent vatten ----- 86 mL
−
Tiaminhydroklorid 0,01 g
 
−
L-kanavanin 0,3 g
 
  
−
pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C
+
*Färdigt medium:
 +
**Basagar, autoklaverad, flytande ----- 90 mL
 +
**Kanavaninlösning, sterilfiltrerad ----- 10 mL
  
−
Beredning Basagar:
+
*Ingående komponenter
−
1. Blanda agar och vatten i kolv och lös under
+
**Kaliumdivätefosfat ----- 10 g
−
omskakning och kokning
+
**Magnesiumsulfat ----- 10 g
−
2. Tillsätt bromtymolblått och skaka om.
+
**Glycin ----- 100 g
−
3. Autoklavera 15 min vid 121 °C
+
**Tiaminhydroklorid ----- 0,01 g
−
Efter autoklavering:
+
**L-kanavanin ------ 0,3 g
−
4. Efter autoklavering och då mediet tempererats till
 
−
ca 50 °C tillsättes den likaledes tempererade
 
−
kanavaninlösningen. Arbeta sterilt i sterilbänk.
 
−
139
 
  
 +
pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C
  
 +
'''Beredning av Basagar'''
 +
*1. Blanda agar och vatten i kolv och lös under omskakning och kokning
 +
*2. Tillsätt bromtymolblått och skaka om.
 +
*3. Autoklavera 15 min vid 121 °C
 
   
 
   
 +
'''Efter autoklavering'''
 +
*4. Efter autoklavering och då mediet tempererats till ca 50 °C tillsättes den likaledes tempererade kanavaninlösningen. Arbeta sterilt i sterilbänk.
  
−
Bilaga 3:13
+
=== Kaseinagar, vitaminfri och med tillsats av inositol och tiamin ===
  
−
KASEINAGAR, VITAMINFRI OCH MED TILLSATS
+
'''Indikation'''
−
AV INOSITOL OCH TIAMIN
+
*Testa dermatofyters vitaminberoende
  
−
Indikation Testa dermatofyters vitaminberoende
+
'''Princip'''
−
Princip Vitaminförsök.  
+
*Vitaminförsök.  
−
Medium/
 
−
Substrat  Vitaminfritt kaseinhydrolysat, Difco 1,25 g
 
−
Kaliumdivätefosfat, KH2PO4, p.a. 0,9 g
 
−
Magnesiumsulfat, MgSO4 x 7 H2O, p.a. 0,1 g
 
−
Glukos 20 g
 
−
Agar, Difco 0140 10 g
 
−
Ultrarent vatten 500 mL
 
  
−
Beredning 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolv.
 
−
2. Lös under omskakning och uppkokning.
 
−
Kontrollera att mediet inte fastnar på
 
−
kolvens botten under uppvärmningen.
 
−
3. Autoklavera 15 min vid +121 °C.
 
−
4. Dela satsen i två delar.
 
−
5. Till en del av satsen sätts (sterilfiltrerad):
 
−
Inositol 50 mg/L
 
−
Tiamin 200 mg/L
 
−
Till den andra delen görs inga tillsatser
 
  
−
140
+
'''Medium/Substrat'''
 +
 
 +
*Ingående komponenter
 +
**Vitaminfritt kaseinhydrolysat, Difco ----- 1,25 g
 +
**Kaliumdivätefosfat, KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>, p.a. ----- 0,9 g
 +
**Magnesiumsulfat, MgSO<sub>4</sub> x 7 H<sub>2</sub>O, p.a.----- 0,1 g
 +
**Glukos ----- 20 g
 +
**Agar, Difco 0140 ----- 10 g
 +
**Ultrarent vatten ----- 500 mL
  
 +
'''Beredning'''
 +
*1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolv.
 +
*2. Lös under omskakning och uppkokning. Kontrollera att mediet inte fastnar på kolvens botten under uppvärmningen.
 +
*3. Autoklavera 15 min vid +121 °C.
 +
*4. Dela satsen i två delar.
 +
*5. Till en del av satsen sätts (sterilfiltrerad)
 +
** Inositol ----- 50 mg/L
 +
**Tiamin ----- 200 mg/L
  
−
 
  
−
Bilaga 3:14
+
Till den andra delen görs inga tillsatser
−
LITTMAN OXGALLAAGAR
 
  
−
Indikation  Differentialdiagnostik av dermatofyter.
 
  
−
Princip Selektivt medium:
 
−
Kristallviolett (bakteriostatiskt medel) hämmar
 
−
bakterieväxt.
 
−
Oxgalla hindrar spridning av svampkolonier.
 
−
Speciellt koloniutseende för olika dermatofyter.
 
  
−
Medium/ Littman Oxgall Agar, Difco 0294 55 g
 
−
Substrat
 
−
Ingående komponenter:
 
−
Pepton 10 g
 
−
Glukos 10 g
 
−
Oxgalla 15 g
 
−
Agar 20 g
 
−
Kristallviolett 0,01 g
 
−
Ultrarent vatten 1000 mL
 
  
−
pH 7,0 + 0,2 vid 25 °C
+
=== Littman oxgallaagar ===
 +
 +
  
−
Beredning 1. Blanda pulver och vatten i kolven.
+
'''Indikation''' 
−
2. Lös under omskakning och kokning.
+
*Differentialdiagnostik av dermatofyter.  
−
Kontrollera under uppvärmningen att mediet inte
 
−
fastnar på kolvens botten
 
−
3. Autoklavera 15 min vid 121°C
 
−
141
 
  
 +
'''Princip '''
 +
*Selektivt medium: Kristallviolett (bakteriostatiskt medel) hämmar bakterieväxt.
 +
*Oxgalla hindrar spridning av svampkolonier.
 +
*Speciellt koloniutseende för olika dermatofyter.
  
 +
'''Medium/Substrat Littman Oxgall Agar, Difco 0294  55 g'''
 
   
 
   
 +
*Ingående komponenter
 +
**Pepton ----- 10 g
 +
**Glukos ----- 10 g
 +
**Oxgalla ----- 15 g
 +
**Agar ----- 20 g
 +
**Kristallviolett ----- 0,01 g
 +
**Ultrarent vatten ----- 1000 mL
  
−
Bilaga 3:15
+
pH 7,0 + 0,2 vid 25 °C
  
 +
*Beredning
 +
**1. Blanda pulver och vatten i kolven.
 +
**2. Lös under omskakning och kokning. Kontrollera under uppvärmningen att mediet inte fastnar på kolvens botten
 +
**3. Autoklavera 15 min vid 121°C
 +
  
−
MALTAGAR
 
  
 +
=== Maltagar ===
  
−
Indikation Makro- och mikromorfologi för jäst- och mögelsvamp.  
+
'''Indikation'''
−
Princip  
+
*Makro- och mikromorfologi för jäst- och mögelsvamp.
 +
 +
'''Princip'''
 +
*Text saknas
  
−
Medium/  
+
'''Medium/substrat'''
−
substrat Destillerat vatten 1000 mL
+
−
Maltagar (Difco) 45 g
+
*Ingående komponenter
−
Ingående komponenter:  
+
**Destillerat vatten ----- 1000 mL
−
Maltextrakt Difco 30 g
+
**Maltagar (Difco) ----- 45 g
−
Bacto Agar 15 g
+
 
 +
*Ingående komponenter i Maltagar (Difco):  
 +
**Maltextrakt Difco -----  30 g
 +
**Bacto Agar ----- 15 g
  
 
Löses med hjälp av värme  
 
Löses med hjälp av värme  
−
OBS Bränner mycket lätt vid  
+
 
 +
'''OBS Bränner mycket lätt vid'''
 +
 
pH 5,5 ± 0,2  
 
pH 5,5 ± 0,2  
 +
 
Autoklaveras 20 min vid 120 °C.  
 
Autoklaveras 20 min vid 120 °C.  
−
 
−
142
 
−
 
−
 
 
   
 
   
  
−
Bilaga 3:16
 
  
 +
=== Mycobioticagar ===
  
−
MYCOBIOTICAGAR
 
  
−
Indikation För isolering av framför allt dermatofyter.  
+
'''Indikation'''
 +
*För isolering av framför allt dermatofyter.  
  
−
Princip Selektivt medium:  
+
'''Princip'''
−
Cykloheximid hämmar saprofytisk svamp samt vissa  
+
*Selektivt medium: Cykloheximid hämmar saprofytisk svamp samt vissa patogena svampar  
−
patogena svampar  
+
*Kloramfenikol hämmar bakterier  
−
Kloramfenikol hämmar bakterier  
+
*Sojaton är ett enzymatiskt hydrolysat av sojabönsmjöl, vilket gynnar tillväxten av bl. a. svamp.  
−
Sojaton är ett enzymatiskt hydrolysat av sojabönsmjöl,  
 
−
vilket gynnar tillväxten av bl. a. svamp.  
 
  
−
Medium/ Mycobiotic Agar, Difco 0689 35,6 g  
+
'''Medium/Substrat  Mycobiotic Agar, Difco 0689   35,6 g'''
−
Substrat
+
−
Ingående komponenter:  
+
*Ingående komponenter:  
−
Sojaton 10 g  
+
**Sojaton ----- 10 g  
−
Glukos 10 g  
+
**Glukos ----- 10 g  
−
Agar 15 g  
+
**Agar ----- 15 g  
−
Cykloheximid 0,05 g  
+
**Cykloheximid ----- 0,05 g  
−
Kloramfenikol 0,05 g  
+
**Kloramfenikol ----- 0,05 g  
−
Ultrarent vatten 1000 mL  
+
**Ultrarent vatten ----- 1000 mL  
  
 
pH 6,5 + 0,2 vid 25 °C  
 
pH 6,5 + 0,2 vid 25 °C  
  
−
Beredning 1. Blanda pulver och vatten i kolven.  
+
*Beredning
−
2. Lös under omskakning och kokning.  
+
**1. Blanda pulver och vatten i kolven.  
−
3. Autoklavera 10 min vid 121 °C  
+
**2. Lös under omskakning och kokning.  
−
143
+
**3. Autoklavera 10 min vid 121 °C  
  
  
 
   
 
   
 +
=== Modifierad kaliumnitritagar (MKA) ===
 +
  
−
Bilaga 3:17
+
'''Indikation'''
 +
*För studium av jästsvampars assimilation av nitrat
  
−
MODIFIERAD KALIUMNITRATAGAR (MKA)
+
'''Princip'''
 +
*Differentierande medium: Mediet innehåller nitrat som enda kvävekälla i tillräcklig koncentration för att ge synlig växt.
 +
Yeast Carbon Base innehåller låga koncentrationer av aminosyror och vitaminer samt spårelement och salter. Positiva arter gör mediet basiskt och pH-indikatorn slår om till blågrönt-blått.
  
−
Indikation För studium av jästsvampars assimilation av nitrat
+
'''Medium/Substrat'''
  
−
Princip Differentierande medium:
+
*Ingående komponenter
−
Mediet innehåller nitrat som enda kvävekälla i tillräcklig
+
**Kaliumnitrat, KNO<sub>3</sub>, p.a.----- 0,7 g
−
koncentration för att ge synlig växt.
+
**Agar Noble, Difco 0142----- 8 g
−
Yeast Carbon Base innehåller låga koncentrationer av
+
**Bromtymolblått----- 0,06 g
−
aminosyror och vitaminer samt spårelement och salter.
+
**Yeast Carbon Base, Difco 0391 ----- 0,8 g
−
Positiva arter gör mediet basiskt och pH-indikatorn slår
+
**Ultrarent vatten ----- 500 mL
−
om till blågrönt-blått.
 
  
−
Medium/ Kaliumnitrat, KNO3, p.a. 0,7 g
 
−
Substrat Agar Noble, Difco 0142 8 g
 
−
Bromtymolblått 0,06 g
 
−
Yeast Carbon Base, Difco 0391 0,8 g
 
−
Ultrarent vatten 500 mL
 
 
pH 5,9 - 6,0 vid ca 25 °C  
 
pH 5,9 - 6,0 vid ca 25 °C  
  
−
Beredning 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolven.  
+
'''Beredning'''
−
2. Lös genom omskakning och kokning.  
+
*1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolven.  
−
3. Autoklavera 15 min vid 121°C.  
+
*2. Lös genom omskakning och kokning.  
−
144
+
*3. Autoklavera 15 min vid 121°C.  
  
  
−
 
  
−
Bilaga 3:18
+
=== Natriumtaurokolatagar ===
  
−
NATRIUMTAUROKOLATAGAR
+
'''Indikation'''
 +
*Bildning av klamydokonidier hos ''Candida albicans'' och typiska pseudohyfarrangemang hos andra jästarter.
  
 +
'''Medium/Substrat'''
  
−
Indikation Bildning av klamydokonidier hos Candida albicans
+
*Ingående komponenter
−
och typiska pseudohyfarrangemang hos andra jästarter.
+
**Natrium-Taurokolat Merck ----- 10 g
 +
**Agar (granulerad BBL)----- 12 g
 +
**Destillerat vatten ----- 1000 mL
  
−
Medium/
 
−
substrat Natrium-Taurokolat Merck 10 g
 
−
Agar (granulerad BBL) 12 g
 
−
Destillerat vatten 1000 mL
 
 
pH 7,5 ± 0,1  
 
pH 7,5 ± 0,1  
 +
 
Steriliseras 15 min vid 120 °C  
 
Steriliseras 15 min vid 120 °C  
  
−
145
 
  
  
−
+
=== Potatisglukosagar ===
  
−
Bilaga 3:19
 
  
−
POTATISGLUKOSAGAR
+
'''Indikation'''
 +
*Mikromorfologi hos svamp. Röd-beige färg på baksidan vid växt av ''T. rubrum''
  
 +
'''Medium/substrat'''
  
−
Indikation Mikromorfologi hos svamp.
+
*Ingående komponenter
−
Röd-beige färg på baksidan vid växt av T. rubrum
+
**Potatisglukosagar (Difco 0013-01-4)----- 15,6 g
 +
**Destillerat vatten----- 400 mL
  
−
Medium/
+
'''Beredning'''
−
substrat Potatisglukosagar (Difco 0013-01-4) 15,6 g
+
*Lös genom kokning.
−
Destillerat vatten 400 mL
+
*Autoklavera 15 min vid 120 °C.
  
−
Beredning Lös genom kokning.
 
−
Autoklavera 15 min vid 120 °C.
 
 
pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C  
 
pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C  
  
−
146
 
  
  
 +
 +
=== Rapid Assimilation Trehalose (RAT)-buljong ===
 
   
 
   
  
−
Bilaga 3:20
 
−
Rapid Assimilation Trehalose (RAT)-buljong
 
  
 +
'''Indikation'''
 +
*Snabb identifiering av ''Candida glabrata''. Utförande av test beskrivs i artikeln [[Identifiering-Jäst#RAT-test (Rapid Assimilation of Trehalose) utförs för att snabbidentifiera Candida glabrata|Identifiering av jäst]]. 
  
−
Indikation Snabb identifiering av Candida glabrata
 
−
Utförande av test beskrivs på sid 88
 
  
−
Princip Påvisa C. glabratas snabba trehalosassimilation.  
+
'''Princip'''
 +
*Påvisa ''C. glabrata''s snabba trehalosassimilation.  
  
−
Kemikalier Lösning 1:  
+
*Kemikalier Lösning 1:  
−
Yeast Nitrogen Base,
+
**Yeast Nitrogen Base -----
−
Difco 0392-15-9 134 mg  
+
**Difco 0392-15-9 ----- 134 mg  
−
Ultrarent vatten 10 mL  
+
**Ultrarent vatten ----- 10 mL  
  
−
Lösning 2:  
+
*Lösning 2:  
−
Trehalos, Sigma T-5251 4 g  
+
**Trehalos, Sigma T-5251 ----- 4 g  
−
Ultrarent vatten 10 mL  
+
**Ultrarent vatten ----- 10 mL  
  
−
Lösning 3:  
+
*Lösning 3:  
−
Bromkresolgrönt, Merck 8121 8 mg  
+
**Bromkresolgrönt, Merck 8121 ----- 8 mg  
−
Etanol 95% 0,1 mL  
+
**Etanol 95 % ----- 0,1 mL  
−
Natriumhydroxid 0,01 mol/L 0,6 mL  
+
**Natriumhydroxid 0,01 mol/L ----- 0,6 mL  
−
Ultrarent vatten 9,3 mL  
+
**Ultrarent vatten ----- 9,3 mL  
−
Lösning 4:
 
  
−
Cykloheximid, Sigma C-6255 10 mg  
+
*Lösning 4:
−
Ultrarent vatten 1,0 mL  
+
**Cykloheximid, Sigma C-6255 ----- 10 mg  
 +
**Ultrarent vatten ----- 1,0 mL  
  
−
Beredning
 
−
Lösning 1:
 
−
Väg upp substansen direkt i ett skruvlocksrör och
 
−
tillsätt vattnet. Löses under försiktig uppvärmning
 
−
och omblandning.
 
  
−
Lösning 2:
+
'''Beredning'''
−
Väg upp sockret direkt i ett skruvlocksrör och tillsätt  
+
−
vattnet. Löses genom omskakning. Lösningen kan sparas
+
*Lösning 1:
−
om den sterilfiltreras ned i ett sterilt rör i rumstemperatur.  
+
**Väg upp substansen direkt i ett skruvlocksrör och tillsätt vattnet. Löses under försiktig uppvärmning och omblandning.  
  
 +
*Lösning 2:
 +
**Väg upp sockret direkt i ett skruvlocksrör och tillsätt vattnet. Löses genom omskakning. Lösningen kan sparas om den sterilfiltreras ned i ett sterilt rör i rumstemperatur.
  
−
147
+
*Lösning 3:
 +
**Väg upp färgen direkt i ett skruvlocksrör och lös den i alkoholen. Tillsätt NaOH och späd med vattnet. Lösningen kan sparas om den sterilfiltreras ned i ett sterilt rör i rumstemperatur.
  
 +
*Lösning 4:
 +
**Väg upp cykloheximiden direkt i ett skruvlocksrör och lös den i vattnet.
  
−
+
Blanda samman i ett skruvlocksrör de fyra ovan beskrivna lösningarna enligt följande:
 +
*Lösning 1 8 mL
 +
*Lösning 2 1 mL
 +
*Lösning 3 1 mL
 +
*Lösning 4 40 mL
  
−
Lösning 3:
+
Kontrollera pH, som skall vara 5,4-5,5 och justera det eventuellt med en droppe NaOH 1 mol/L.  
−
Väg upp färgen direkt i ett skruvlocksrör och lös den i
 
−
alkoholen. Tillsätt NaOH och späd med vattnet.
 
−
Lösningen kan sparas om den sterilfiltreras ned i ett
 
−
sterilt rör i rumstemperatur.  
 
  
−
Lösning 4:
+
Sterilfiltrera mediet ned i ett sterilt skruvlocksrör.  
−
Väg upp cykloheximiden direkt i ett skruvlocksrör och lös
 
−
den i vattnet.  
 
  
−
Blanda samman i ett skruvlocksrör de fyra ovan
+
'''Förvaring'''
−
beskrivna lösningarna enligt följande:  
+
*RAT-medium: Rumstemperatur
−
Lösning 1 8 mL
+
*Lösningarna 2 och 3: Rumstemperatur
−
Lösning 2 1 mL
+
*Lösningarna 1 och 4 sparas inte.
−
Lösning 3 1 mL
 
−
Lösning 4 40 mL
 
  
−
Kontrollera pH, som skall vara 5,4-5,5 och justera det
 
−
eventuellt med en droppe NaOH 1 mol/L.
 
−
Sterilfiltrera mediet ned i ett sterilt skruvlocksrör.
 
  
−
Förvaring
+
'''Hållbarhet'''
−
RAT-medium: Rumstemperatur
+
*RAT-medium: 6 månader
−
Lösningarna 2 och 3: Rumstemperatur
+
*Lösningarna 2 och 3: 1 år
−
Lösningarna 1 och 4 sparas inte.  
+
 
 +
'''OBS! Cykloheximid är giftigt och bör hanteras enligt anvisningarna för arbete med farliga kemikalier.'''
  
−
Hållbarhet
+
=== Sabouraudagar med streptomycin och penicillin ===
−
RAT-medium: 6 månader
 
−
Lösningarna 2 och 3: 1 år
 
  
−
OBS! Cykloheximid är giftigt och bör hanteras enligt
+
'''Indikation'''
−
anvisningarna för arbete med farliga kemikalier.  
+
*Odling av svamp från bakteriekontaminerat prov.  
  
−
148
+
'''Princip'''
 +
*Peptonet är mycket näringsrikt. Glukostillsatsen samt det låga pH-värdet är också gynnsamt för svampväxt.
 +
*Penicillin samt streptomycin inhiberar bakterieväxt; svamp påverkas ej.
  
 +
'''Medium/Substrat'''
  
−
+
*Ingående komponenter
 +
**Glukos 4 ----- 0 g
 +
**Pepton ----- 10 g
 +
**Agar No 1----- 13,5 g
 +
**Ultrarent vatten ----- 1000 mL
  
−
Bilaga 3:21
+
Färdig Sabouraudagarbas finns tillgänglig (Oxoid, Difco, BBL)
  
−
SABOURAUDAGAR MED STREPTOMYCIN
+
pH 5,6 ± 0,2 vid 25 °C
−
OCH PENICILLIN
 
  
−
Indikation Odling av svamp från bakteriekontaminerat prov.
+
*Penicillin G ----- 6 mg
 +
*Streptomycin ----- 12,5 mg
  
−
Princip Peptonet är mycket näringsrikt.
+
(lösta i 5 mL ultrarent vatten, steril)
−
Glukostillsatsen samt det låga pH-värdet är också
 
−
gynnsamt för svampväxt.
 
−
Penicillin samt streptomycin inhiberar bakterieväxt;
 
−
svamp påverkas ej.
 
  
−
Medium/ Glukos 4 0 g
 
−
Substrat Pepton 10 g
 
−
Agar No 1 13,5 g
 
−
Ultrarent vatten 1000 mL
 
−
Färdig Sabouraudagarbas finns tillgänglig
 
−
(Oxoid, Difco, BBL)
 
  
−
pH 5,6 ± 0,2 vid 25 °C  
+
'''Beredning'''
 +
*1. Blanda glukos, pepton och agar med vattnet i kolven.
 +
*2. Lös genom omskakning och kokning.
 +
*3. Autoklavera 15 min vid 121 °C
 +
 +
Efter autoklavering
 +
 +
*4. Efter autoklavering och då mediet tempererats till ca 50 °C tillsättes antibiotikalösningen sterilt
  
−
Penicillin G 6 mg
 
−
Streptomycin 12,5 mg
 
−
(lösta i 5 mL ultrarent vatten, steril)
 
  
−
Beredning
 
−
1. Blanda glukos, pepton och agar med vattnet i kolven.
 
−
2. Lös genom omskakning och kokning.
 
−
3. Autoklavera 15 min vid 121 °C
 
−
Efter autoklavering
 
−
4. Efter autoklavering och då mediet tempererats till ca
 
−
50 °C tillsättes antibiotikalösningen sterilt
 
−
149
 
  
  
−
+
=== Ureaagar ===
  
−
Bilaga 3:22
+
'''Indikation '''
−
UREAAGAR
+
*Påvisa ureasaktivitet
  
−
Indikation Påvisa ureasaktivitet  
+
'''Princip '''
 +
*Differentierande medium: Peptonet gynnar tillväxten av svamp. pH-indikatorn fenolrött visar alkalisk reaktion (rosaröd
 +
färg) då urea p.g.a. ureasaktivitet omvandlas till ammoniak.
  
−
Princip Differentierande medium:  
+
'''Medium/Substrat Basmedium:'''
−
Peptonet gynnar tillväxten av svamp.
 
−
pH-indikatorn fenolrött visar alkalisk reaktion (rosaröd
 
−
färg) då urea p.g.a. ureasaktivitet omvandlas till
 
−
ammoniak.
 
  
−
Medium/ Basmedium:
+
*Ingående komponenter
−
Substrat
+
**Mycological Peptone, Oxoid L 40----- 1 g  
−
Mycological Peptone, Oxoid L 40 1 g  
+
**Glukos ----- 1 g  
−
Glukos 1 g  
+
**Natriumklorid, NaCl, p.a. ----- 5 g  
−
Natriumklorid, NaCl, p.a. 5 g  
+
**Dinatriumvätefosfat, Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> x 2 H<sub>2</sub>O, p.a. ----- 1,5 g  
−
Dinatriumvätefosfat, Na2HPO4 x 2 H2O, p.a. 1,5 g  
+
**Kaliumdivätefosfat, KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>, p.a. ----- 0,8 g  
−
Kaliumdivätefosfat, KH2PO4, p.a. 0,8 g  
+
**Fenolrött ----- 0,012 g  
−
Fenolrött 0,012 g  
+
**Agar No 3, Oxoid L 13 ----- 12 g  
−
Agar No 3, Oxoid L 13 12 g  
+
**Ultrarent vatten ----- 1000 mL  
−
Ultrarent vatten 1000 mL  
 
  
 
pH 6,8 + 0,2 vid 25 °C  
 
pH 6,8 + 0,2 vid 25 °C  
  
−
Slutlig blandning
 
−
Basmedium, autoklaverat 200 mL
 
−
Urea, 40 %, sterilf. 10 mL/200 mL medium
 
  
−
Beredning
+
'''Slutlig blandning'''
−
Basmedium  
+
*Basmedium, autoklaverat ----- 200 mL
 +
*Urea, 40 %, sterilfitrerad ----- 10 mL/200 mL medium
  
−
1. Blanda alla ingredienser med vattnet i kolven.
 
−
2. Lös genom omskakning och kokning.
 
−
3. Autoklavera 15 min vid 121°C
 
−
Efter autoklavering
 
−
4. Efter autoklavering eller smältning och då mediet
 
−
tempererats till 50°C tillsättes urealösningen sterilt.
 
−
150
 
  
 +
'''Beredning'''
 +
*Basmedium
 +
**1. Blanda alla ingredienser med vattnet i kolven.
 +
**2. Lös genom omskakning och kokning.
 +
**3. Autoklavera 15 min vid 121°C
 +
 +
*Efter autoklavering
 +
**4. Efter autoklavering eller smältning och då mediet tempererats till 50°C tillsättes urealösningen sterilt.
 +
  
 +
 +
 +
=== Yeast Nitrogen Base (YNB)-agar med asparagin och glukos modifierad enligt Shadomy ===
 
   
 
   
  
−
Bilaga 3:23:1
+
'''Indikation '''
 +
*Resistensbestämning av jästsvamp med diskdiffusion.
  
−
Yeast Nitrogen Base (YNB)-agar med asparagin och  
+
'''Princip '''
−
glukos modifierad enligt Shadomy
+
*Yeast Nitrogen Base (YNB) innehåller små mängder aminosyror, vitaminer och spårelement då vissa svampar saknar förmåga att syntetisera dessa. För att få bättre tillväxt vid resistensbestämning har tillsatts asparagin som en lättillgänglig kvävekälla samt glukos som kol- och energikälla. Kloramfenikol hämmar bakterieväxt.
  
−
Indikation Resistensbestämning av jästsvamp med diskdiffusion.  
+
'''Medium/Substrat'''
 +
*Ingående komponenter
 +
**Natriumfosfatbuffert, pH 7,0; 0,01 mol/L, autoklaverad (se recept nedan)----- 675 mL
 +
**Agar No 1 Oxoid L11 ----- 7.5 g
 +
**YNB-buljong 6,7 % sterilfiltrerad (se recept nedan)----- 75 mL
 +
**Kloramfenikol ----- 75 mg
  
−
Princip Yeast Nitrogen Base (YNB) innehåller små mängder
+
pH 7,0+0,2 vid 25°C
−
aminosyror, vitaminer och spårelement då vissa svampar
 
−
saknar förmåga att syntetisera dessa.
 
−
För att få bättre tillväxt vid resistensbestämning har tillsatts
 
−
asparagin som en lättillgänglig kvävekälla samt glukos som
 
−
kol- och energikälla.
 
−
Kloramfenikol hämmar bakterieväxt.
 
  
−
Medium/
 
−
Substrat Natriumfosfatbuffert, pH 7,0; 0,01 mol/L,
 
−
autoklaverad (se recept nedan) 675 mL
 
−
Agar No 1 Oxoid L11 7.5 g
 
−
YNB-buljong 6,7 % sterilfiltrerad
 
−
(se recept nedan) 75 mL
 
−
Kloramfenikol 75 mg
 
  
−
pH 7,0+0,2 vid 25°C
+
'''Beredning'''
 +
*Lös agar i fosfatbuffert i en kolv genom skakning och kokning.
 +
*Autoklavera 15 min vid 121 °C
 +
*Temperera lösningen till 50 °C
 +
*Tillsätt YNB-buljongen
 +
*Tillsätt kloramfenikol
 +
*Gjut plattor 20-22 mL per skål.
  
−
Beredning Lös agar i fosfatbuffert i en kolv genom skakning
 
−
och kokning.
 
−
Autoklavera 15 min vid 121 °C
 
−
Temperera lösningen till 50 °C
 
−
Tillsätt YNB-buljongen
 
−
Tillsätt kloramfenikol
 
−
Gjut plattor 20-22 mL per skål.
 
  
−
151
 
  
  
 +
=== Fosfatbuffert till YNB-agar pH 7,0 ===
 
   
 
   
  
−
Bilaga 3:23:2  
+
*Ingredienser
 +
**Natriumdivätefosfat p.a. NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>xH<sub>2</sub>O ----- 0,43 g
 +
Dikaliumvätefosfat p.a. K<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub> ----- 0,85 g
 +
Destillerat/avjoniserat H<sub>2</sub>O till ----- 1000 mL
  
−
Fosfatbuffert till YNB-agar pH 7,0
 
  
−
Ingredienser Natriumdivätefosfat p.a. NaH2PO4xH2O 0,43 g
+
'''Beredning '''
−
Dikaliumvätefosfat p.a. K2HPO4 0,85 g
+
*Lös fosfaterna i nästan hela vattenmängden under magnetomrörning.  
−
Destillerat/avjoniserat H2O till 1000 mL
+
*Justera pH till 7,0 med syra eller bas
 +
*Justera slutvolymen med vatten och dispensera på flaskor som autoklaveras 15 min 121 °C.  
  
−
Beredning Lös fosfaterna i nästan hela vattenmängden
 
−
under magnetomrörning.
 
−
Justera pH till 7,0 med syra eller bas
 
−
Justera slutvolymen med vatten och dispensera
 
−
på flaskor som autoklaveras 15 min 121 °C.
 
 
Förvaring Kyl 2-8°C, upp till 1 år  
 
Förvaring Kyl 2-8°C, upp till 1 år  
  
−
152
 
−
 
−
 
−
 
  
−
Bilaga 3:23:3
 
  
 +
=== YNB-buljong ===
  
−
YNB-buljong
 
  
 +
*Kemikalier
 +
**Yeast Nitrogen Base, Difco ----- 67 g
 +
**L-asparagin, p.a. ----- 15 g
 +
**Glukos, p.a. ----- 100 g
 +
Destillerat/avjoniserat H<sub>2</sub>O upp till ----- 1000 mL
  
−
Kemikalier Yeast Nitrogen Base, Difco 67 g
 
−
L-asparagin, p.a. 15 g
 
−
Glukos, p.a. 100 g
 
−
Destillerat/avjoniserat H2O upp till 1000 mL
 
  
−
Beredning  
+
'''Beredning'''
−
Väg upp substanserna i 1000 mL bägare och lös i  
+
*Väg upp substanserna i 1000 mL bägare och lös i ca 800 mL vatten med magnetomrörning.  
−
ca 800 mL vatten med magnetomrörning.  
+
*Häll i mätkolven och justera med vatten till 1000 mL.  
−
Häll i mätkolven och justera med vatten till 1000 mL.  
+
*Sterilfiltrera (Ultrafilter 0,2 m, MediaKap®-5) direkt ned i sterila 100 mL flaskor.  
−
Sterilfiltrera (Ultrafilter 0,2 m, MediaKap®-5) direkt ned i  
 
−
sterila 100 mL flaskor.  
 
  
−
Förvaring Kyl 2-8 °C upp till 6 månader.  
+
Förvaring: Kyl 2-8 °C upp till 6 månader.  
 
   
 
   
  
 
[[Kategori:Svampinfektioner]]
 
[[Kategori:Svampinfektioner]]

Nuvarande version från 7 april 2010 kl. 11.30

Till innehållsförteckningen för Referensmetodik:Svampinfektioner

Bilaga 3[redigera]

Referenssubstrat-Svampdiagnostik[redigera]

Inom mykologin används ett stort antal olika substrat för att optimalt isolera och identifiera olika jästsvampar, dermatofyter, övriga mögel och dimorfa svampar. De här angivna substraten utgör ett basalt urval men behöver ej ses som en bindande rekommendation. Varje svamplaboratorium har sina behov och kan föredra andra substrat. Recepten bifogas för att på ett enkelt sätt vara tillgängliga och för att underlätta en standardisering inom landet. De flesta substraten finns beskrivna i Difco Manual.


Hållbarhet för medier, allmänt[redigera]

  • Plattor 4 veckor i förseglad plast
  • Rör med plasthatt 3 mån
  • Skruvlocksrör 6 mån


Arbutinagar[redigera]

Indikation

  • Diagnostik av jästsvamp

Princip

  • Differentierande medium:
  • Mörkbrun utfällning bildas runt svampen i substratet beroende på att arbutin hydrolyseras.

Medium/Substrat Arbutinagarbas 200 mL

  • Ingående komponenter:
    • Arbutin ----- 1 g
    • Agar No 1, Oxoid L 11 ----- 2,2 g
    • Jästextrakt, Difco 0127 ----- 1,4 g
    • Ultrarent vatten ----- 200 mL
    • Järn(III)klorid, 10 %, sterilf. 1,3 mL


Beredning

  • 1. Smält basagarn och temperera den till ca 50 °C.
  • 2. Tillsätt järnkloridlösningen.
  • 3. Gjut agarplattor, ca 20 mL per skål.


Assimilationsagar[redigera]

Indikation

  • Artbestämning av jästsvamp (kolhydratassimilation).

Princip

  • Differentierande medium: Mediet saknar kol- och energikälla i tillräcklig koncentration för att ge synlig växt. Tillförsel av olika sockerarter kan fungera som kol- och energikälla, olika för olika sockerarter. Växten upptäcks lättare genom att sura produkter bildas, vilket ändrar pH-indikatorns färg till gul.

Medium/Substrat Kaliumdivätefosfat, KH2PO4, p.a. 1 g

  • Ingående komponenter:
    • Magnesiumsulfat, MgSO4 x 7 H2O, p.a.----- 0,5 g
    • Ammoniumsulfat, (NH4)2SO4, p.a.----- 5 g
    • Agar ----- 15 g
    • Bromkresolpurpur ----- 0,05 g
    • 1 mol/L NaOH, nyberedd ----- 0,05 mL
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL


pH 6,6 + 0,1 vid 25 °C


Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolv.
  • 2. Lös under omskakning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C.



Brain Heart Infusion (BHI)-agar[redigera]

Indikation

  • Svampodling

Princip

  • Antibiotika för hämning av bakterier tillsätts efter behov. Blod (5 %) kan tillsättas för dimorfa svampar med högre näringskrav än ordinära svampar.

Medium/Substrat

  • Brain Heart Infusion Agar, Difco ----- 26 g
  • Dest. vatten ultrarent ----- 500 mL

pH 7,4 ± 0,2

  • Ingående komponenter:
    • “Calf brains infusion” ----- 200 g
    • “Beef Heart infusion” ----- 250 g
    • Proteospepton ----- 10 g
    • Glukos ----- 2 g
    • Natriumklorid ----- 5 g
    • Dinatriumvätefosfat ----- 2,5 g
    • Bacto Agar ----- 15 g


Beredning

  • 1. Lös med hjälp av värme
  • 2. Autoklavera 120 °C i 20 min
  • 3. Låt svalna till 50 °C


Brom Cresol Purpur Casein Glucose (BCPCG)-agar[redigera]

Indikation

  • Artbestämning av dermatofyter

Princip

  • 1) pH-förhöjning ändrar substratfärgen från gråblå till lila
  • 2) hydrolys av kasein ger uppklarning
  • 3) arttypiskt koloniutseende hos dermatofyter


  • 1.
    • Destillerat vatten ----- 500 mL
    • Skummjölkspulver ----- 40 g
    • Bromkresolpurpur, löst i 1,6 % etanol ----- 1 mL
  • 2.
    • Destillerat vatten ----- 100 mL
    • Glukos ----- 20 g
    • Kloramfenikol ----- 50 mg/L
    • Gentamicin ----- 20 mg/L


  • 3.
    • Destillerat vatten ----- 400 mL
    • Difco agar ----- 15 g


Beredning

  • 1 och 3 autoklaveras separat och blandas
  • 2 sterilfiltreras

pH Justeras till exakt 6,8

Chromagar[redigera]

Indikation

  • Isolering och differentiering av jästsvampar.

Princip

  • Differentierande medium. Speciesspecifikt kromogent substrat (se Tabell 10).


Medium/Substrat CHROM-agar (CHROMagar Comp Paris; ILS Lab, Sverige) 47,5 g


  • Ingående komponenter:
    • Agar ----- 15 g
    • Pepton ----- 10 g
    • Kromogen blandning ----- 22 g
    • Kloramfenikol----- 0,5 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 6,3


Beredning

  • 1. Blanda pulver och vatten i kolv och lös under långsam omrörning medan agarn sväller.
  • 2. Uppvärm till kokning. Omrörning och kokning igen flera gånger tills allt löst sig.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C
  • 4. Efter autoklaveringen, temperera agarlösningen till ca 50 °C.
  • 5. Gjut agarplattor, ca 20 mL per skål.


Corn meal agar (Majsmjölagar)[redigera]

Indikation

  • För identifiering av mikromorfologi hos jästsvamp (se Tabell 10). Rött pigment hos Trichophyton rubrum.

Princip

  • Mediet är huvudsakligen tillverkat av infusion från mald gul majs. Tween 80 (en oljesyraester) sänker ytspänningen och

ökar klamydokonidiebildningen hos Candida albicans. Bildning av pseudohyfer och hyfer i artkarakteristiska formationer.


Medium/Substrat Corn Meal Agar, Difco 0386 17 g

  • Ingående komponenter:
    • Infusion från majsmjöl ----- 50 g
    • Agar ----- 15 g
    • Tween 80 -----10 mL
    • Glukos (endast vid dermatofytdiagnostik för pigmentbildning hos T. rubrum)----- 10 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C


Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolven.
  • 2. Lös genom omskakning och kokning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C

Dermatofyt test medium (DTM)[redigera]

Indikation

  • För isolering och diagnostik av dermatofyter. (C. albicans växer).

Princip

  • Sojapeptonet är en näringskälla och glukos en energikälla. pH-indikatorn fenolrött används för att påvisa alkaliska produkter som bildats vid deaminering av aminosyror, varvid substratet ändrar färg från orange till rött. Cykloheximid hämmar saprofytiska svampar och några få patogena arter såsom Aspergillus och Fusarium. Kloramfenikol är ett bredspektrumantibiotikum som

hämmar många grampositiva och gramnegativa bakterier. Dermatofyter är inte känsliga för dessa antibiotika.


Medium/Substrat Mycosel Agar, BBL 11462 36 g

  • Ingående komponenter
    • Sojabönsmjöl, papainbehandlat----- 10 g
    • Glukos----- 10 g
    • Agar ----- 15,5 g
    • Cykloheximid ----- 0,4 g
    • Kloramfenikol----- 0,05 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL
    • Fenolrött, 0,5 % ----- 40 mL
    • Gentamicinsulfat (löst i 2 mL ultrarent vatten) ----- 0,1 g


pH 5,5 + 0,2 vid 25 °C


Beredning

  • 1. Lös under omskakning och kokning.
  • 2. Tillsätt gentamicin (aktiviteten bör ha kontrollerats).
  • 3. Autoklavera 7 min vid 121 °C.



Glukosblodagar[redigera]

Indikation

  • För odling av framför allt jästsvamp

Princip

  • Rikt allmänt medium: Peptonerna tillför aminosyror och jästextraktet förser mediet med vitaminer, främst från B-gruppen. Tillsats av hästblod ger ytterligare tillväxtsubstanser. Glukostillsatsen är en lättillgänglig kol- och energikälla.


Medium/Substrat Columbia II Agar Base, BBL 97596 360 g

  • Ingående komponenter (g/L)
    • Kasein, nedbrutet med pankreasenzymer ----- 11,5 g
    • Djurvävnad, behandlad med pepsin ----- 5,0 g
    • Jästextrakt ----- 3,5 g
    • Hjärtmuskel, behandlad med pankreasenzymer ----- 3,0 g
    • Majsstärkelse ----- 1,0 g
    • Natriumklorid ----- 5,0 g
    • Agar ----- 13,5 g
    • Glukos ----- 180 g
    • Ultrarent vatten ----- 9000 mL
    • Hästblod, citratbehandlat ----- 600 mL

pH 7,3 ± 0,2


Beredning

  • 1. Blanda agarpulver, glukos och vatten i kastrullen och häll blandningen i mediaberedaren
  • 2. Autoklavera 15 min vid 121°C
  • 3. Efter autoklavering temperera agarlösningen till ca 50 °C och tillsätt hästblod
  • 4. Vankomycin till 10 mg/L samt kloramfenikol till 0,5 mg/L
  • 5. Gjut agarplattor, ca 25 mL per skål


Glukosbuljong för anrikning av svamp[redigera]

Indikation

  • Anrikningsmedium för bl.a. kryptokocker i likvor.

Princip

  • Köttextrakt och pepton innehåller kväve; glukos är en kol- och energikälla. Natriumklorid tillför mediet salt.

Medium/Substrat Nutrient Broth No 2, Oxoid CM 67 25 g

  • Ingående komponenter
    • ´Lab Lemco´ pulver ----- 10,0 g
    • Pepton ----- 10,0 g
    • Natriumklorid ----- 5,0 g
    • Glukos ----- 10 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 7,5 + 0,2 vid 25 °C


Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolven.
  • 2. Lös under omrörning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C



Fågelfröagar[redigera]

Indikation

  • Speciesdiagnostik av Cryptococcus neoformans.

Princip

  • Selektivt och differentierande medium: C. neoformans har förmåga att bilda fenoloxidas, vilket avslöjas som brunpigmentering av kolonierna.

Medium/Substrat Agar, Difco 15 g

  • Ingående komponenter
    • Glukos ----- 1 g
    • Kreatinin ----- 1 g
    • Kaliumdivätefosfat, KH2PO4, p.a.----- 1 g
    • Fågelfrö, Guizotia abyssinica frö ----- 50 g
    • Kloramfenikol----- 1 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL


Beredning

  • 1. Pulvrisera fågelfröna i mortel med 100 mL vatten
  • 2. Häll dem i kolv tillsammans med 1000 mL vatten och koka i ca 30 min
  • 3. Filtrera genom gasväv och mät upp volymen av extraktet till 1000 mL med vatten
  • 4. Tillsätt övriga ingredienser till filtratet och lös dem genom kokning
  • 5. Autoklavera 15 min vid 121 °C

Efter autoklavering:

  • 6. Efter avsvalning till ca 50 °C tillsättes kloramfenikol, som är löst i 5 mL alkohol



Jäsningsmedium för svamp med glukos m. fl. sockerarter[redigera]

Indikation

Princip

  • Differentierande medium: Jäsning av glukos, galaktos, sackaros, maltos, laktos, trehalos, raffinos.
  • Jäsning, med synlig gasbildning. Vid gasbildning samlas denna upp i det inre upp- och nervända durhamröret.

Medium/ Substrat Basbuljong

  • Ingående komponenter
    • Jästextrakt, Difco 0127 ----- 14 g
    • Ultrarent vatten ----- 2800 mL
    • Glukos ----- 8 g/400 mL

pH 6,6 + 0,2 vid ca 25 °C


Beredning

  • 1. Blanda jästextrakt och vatten i kolven.
  • 2. Lös under omrörning.
  • 3. Sätt 400 mL till 7 st kolvar.
  • 4. Tillsätt glukos till 1 kolv innehållande 400 mL
  • 5. Spara de övriga portionerna till resterande sockerarter.
  • 6. Dispensera 3 mL/rör. Använd dispenseringsapparat.
  • 7. Autoklavera 30 min 100 °C (strömmande ånga) 2 dagar i följd.


Kanavaninagar[redigera]

Indikation

  • Differentiering av serotyper av Cryptococcus neoformans och Cryptococcus gattii.

Princip

  • Differentierande medium: Aminosyran kanavanin (basisk) samt pH-indikatorn bromtymolblått är tillsatta i mediet. Kanavanin fungerar som substrat för C. gattii, varvid basiska produkter bildas, vilket höjer pH och mediet blir blått vid serotyp B,C.

Medium/Substrat Basagar


  • Ingående komponenter
    • Agar, Difco 0140 ----- 2 g
    • Bromtymolblått ----- 4 mL
    • Ultrarent vatten ----- 86 mL
  • Färdigt medium:
    • Basagar, autoklaverad, flytande ----- 90 mL
    • Kanavaninlösning, sterilfiltrerad ----- 10 mL
  • Ingående komponenter
    • Kaliumdivätefosfat ----- 10 g
    • Magnesiumsulfat ----- 10 g
    • Glycin ----- 100 g
    • Tiaminhydroklorid ----- 0,01 g
    • L-kanavanin ------ 0,3 g

pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C

Beredning av Basagar

  • 1. Blanda agar och vatten i kolv och lös under omskakning och kokning
  • 2. Tillsätt bromtymolblått och skaka om.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C

Efter autoklavering

  • 4. Efter autoklavering och då mediet tempererats till ca 50 °C tillsättes den likaledes tempererade kanavaninlösningen. Arbeta sterilt i sterilbänk.

Kaseinagar, vitaminfri och med tillsats av inositol och tiamin[redigera]

Indikation

  • Testa dermatofyters vitaminberoende

Princip

  • Vitaminförsök.


Medium/Substrat

  • Ingående komponenter
    • Vitaminfritt kaseinhydrolysat, Difco ----- 1,25 g
    • Kaliumdivätefosfat, KH2PO4, p.a. ----- 0,9 g
    • Magnesiumsulfat, MgSO4 x 7 H2O, p.a.----- 0,1 g
    • Glukos ----- 20 g
    • Agar, Difco 0140 ----- 10 g
    • Ultrarent vatten ----- 500 mL

Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolv.
  • 2. Lös under omskakning och uppkokning. Kontrollera att mediet inte fastnar på kolvens botten under uppvärmningen.
  • 3. Autoklavera 15 min vid +121 °C.
  • 4. Dela satsen i två delar.
  • 5. Till en del av satsen sätts (sterilfiltrerad)
    • Inositol ----- 50 mg/L
    • Tiamin ----- 200 mg/L


Till den andra delen görs inga tillsatser



Littman oxgallaagar[redigera]

Indikation

  • Differentialdiagnostik av dermatofyter.

Princip

  • Selektivt medium: Kristallviolett (bakteriostatiskt medel) hämmar bakterieväxt.
  • Oxgalla hindrar spridning av svampkolonier.
  • Speciellt koloniutseende för olika dermatofyter.

Medium/Substrat Littman Oxgall Agar, Difco 0294 55 g

  • Ingående komponenter
    • Pepton ----- 10 g
    • Glukos ----- 10 g
    • Oxgalla ----- 15 g
    • Agar ----- 20 g
    • Kristallviolett ----- 0,01 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 7,0 + 0,2 vid 25 °C

  • Beredning
    • 1. Blanda pulver och vatten i kolven.
    • 2. Lös under omskakning och kokning. Kontrollera under uppvärmningen att mediet inte fastnar på kolvens botten
    • 3. Autoklavera 15 min vid 121°C


Maltagar[redigera]

Indikation

  • Makro- och mikromorfologi för jäst- och mögelsvamp.

Princip

  • Text saknas

Medium/substrat

  • Ingående komponenter
    • Destillerat vatten ----- 1000 mL
    • Maltagar (Difco) ----- 45 g
  • Ingående komponenter i Maltagar (Difco):
    • Maltextrakt Difco ----- 30 g
    • Bacto Agar ----- 15 g

Löses med hjälp av värme

OBS Bränner mycket lätt vid

pH 5,5 ± 0,2

Autoklaveras 20 min vid 120 °C.


Mycobioticagar[redigera]

Indikation

  • För isolering av framför allt dermatofyter.

Princip

  • Selektivt medium: Cykloheximid hämmar saprofytisk svamp samt vissa patogena svampar
  • Kloramfenikol hämmar bakterier
  • Sojaton är ett enzymatiskt hydrolysat av sojabönsmjöl, vilket gynnar tillväxten av bl. a. svamp.

Medium/Substrat Mycobiotic Agar, Difco 0689 35,6 g

  • Ingående komponenter:
    • Sojaton ----- 10 g
    • Glukos ----- 10 g
    • Agar ----- 15 g
    • Cykloheximid ----- 0,05 g
    • Kloramfenikol ----- 0,05 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 6,5 + 0,2 vid 25 °C

  • Beredning
    • 1. Blanda pulver och vatten i kolven.
    • 2. Lös under omskakning och kokning.
    • 3. Autoklavera 10 min vid 121 °C


Modifierad kaliumnitritagar (MKA)[redigera]

Indikation

  • För studium av jästsvampars assimilation av nitrat

Princip

  • Differentierande medium: Mediet innehåller nitrat som enda kvävekälla i tillräcklig koncentration för att ge synlig växt.

Yeast Carbon Base innehåller låga koncentrationer av aminosyror och vitaminer samt spårelement och salter. Positiva arter gör mediet basiskt och pH-indikatorn slår om till blågrönt-blått.

Medium/Substrat

  • Ingående komponenter
    • Kaliumnitrat, KNO3, p.a.----- 0,7 g
    • Agar Noble, Difco 0142----- 8 g
    • Bromtymolblått----- 0,06 g
    • Yeast Carbon Base, Difco 0391 ----- 0,8 g
    • Ultrarent vatten ----- 500 mL

pH 5,9 - 6,0 vid ca 25 °C

Beredning

  • 1. Blanda ingredienserna med vattnet i kolven.
  • 2. Lös genom omskakning och kokning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121°C.


Natriumtaurokolatagar[redigera]

Indikation

  • Bildning av klamydokonidier hos Candida albicans och typiska pseudohyfarrangemang hos andra jästarter.

Medium/Substrat

  • Ingående komponenter
    • Natrium-Taurokolat Merck ----- 10 g
    • Agar (granulerad BBL)----- 12 g
    • Destillerat vatten ----- 1000 mL

pH 7,5 ± 0,1

Steriliseras 15 min vid 120 °C


Potatisglukosagar[redigera]

Indikation

  • Mikromorfologi hos svamp. Röd-beige färg på baksidan vid växt av T. rubrum

Medium/substrat

  • Ingående komponenter
    • Potatisglukosagar (Difco 0013-01-4)----- 15,6 g
    • Destillerat vatten----- 400 mL

Beredning

  • Lös genom kokning.
  • Autoklavera 15 min vid 120 °C.

pH 5,6 + 0,2 vid 25 °C



Rapid Assimilation Trehalose (RAT)-buljong[redigera]

Indikation


Princip

  • Påvisa C. glabratas snabba trehalosassimilation.
  • Kemikalier Lösning 1:
    • Yeast Nitrogen Base -----
    • Difco 0392-15-9 ----- 134 mg
    • Ultrarent vatten ----- 10 mL
  • Lösning 2:
    • Trehalos, Sigma T-5251 ----- 4 g
    • Ultrarent vatten ----- 10 mL
  • Lösning 3:
    • Bromkresolgrönt, Merck 8121 ----- 8 mg
    • Etanol 95 % ----- 0,1 mL
    • Natriumhydroxid 0,01 mol/L ----- 0,6 mL
    • Ultrarent vatten ----- 9,3 mL
  • Lösning 4:
    • Cykloheximid, Sigma C-6255 ----- 10 mg
    • Ultrarent vatten ----- 1,0 mL


Beredning

  • Lösning 1:
    • Väg upp substansen direkt i ett skruvlocksrör och tillsätt vattnet. Löses under försiktig uppvärmning och omblandning.
  • Lösning 2:
    • Väg upp sockret direkt i ett skruvlocksrör och tillsätt vattnet. Löses genom omskakning. Lösningen kan sparas om den sterilfiltreras ned i ett sterilt rör i rumstemperatur.
  • Lösning 3:
    • Väg upp färgen direkt i ett skruvlocksrör och lös den i alkoholen. Tillsätt NaOH och späd med vattnet. Lösningen kan sparas om den sterilfiltreras ned i ett sterilt rör i rumstemperatur.
  • Lösning 4:
    • Väg upp cykloheximiden direkt i ett skruvlocksrör och lös den i vattnet.

Blanda samman i ett skruvlocksrör de fyra ovan beskrivna lösningarna enligt följande:

  • Lösning 1 8 mL
  • Lösning 2 1 mL
  • Lösning 3 1 mL
  • Lösning 4 40 mL

Kontrollera pH, som skall vara 5,4-5,5 och justera det eventuellt med en droppe NaOH 1 mol/L.

Sterilfiltrera mediet ned i ett sterilt skruvlocksrör.

Förvaring

  • RAT-medium: Rumstemperatur
  • Lösningarna 2 och 3: Rumstemperatur
  • Lösningarna 1 och 4 sparas inte.


Hållbarhet

  • RAT-medium: 6 månader
  • Lösningarna 2 och 3: 1 år

OBS! Cykloheximid är giftigt och bör hanteras enligt anvisningarna för arbete med farliga kemikalier.

Sabouraudagar med streptomycin och penicillin[redigera]

Indikation

  • Odling av svamp från bakteriekontaminerat prov.

Princip

  • Peptonet är mycket näringsrikt. Glukostillsatsen samt det låga pH-värdet är också gynnsamt för svampväxt.
  • Penicillin samt streptomycin inhiberar bakterieväxt; svamp påverkas ej.

Medium/Substrat

  • Ingående komponenter
    • Glukos 4 ----- 0 g
    • Pepton ----- 10 g
    • Agar No 1----- 13,5 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

Färdig Sabouraudagarbas finns tillgänglig (Oxoid, Difco, BBL)

pH 5,6 ± 0,2 vid 25 °C

  • Penicillin G ----- 6 mg
  • Streptomycin ----- 12,5 mg

(lösta i 5 mL ultrarent vatten, steril)


Beredning

  • 1. Blanda glukos, pepton och agar med vattnet i kolven.
  • 2. Lös genom omskakning och kokning.
  • 3. Autoklavera 15 min vid 121 °C

Efter autoklavering

  • 4. Efter autoklavering och då mediet tempererats till ca 50 °C tillsättes antibiotikalösningen sterilt



Ureaagar[redigera]

Indikation

  • Påvisa ureasaktivitet

Princip

  • Differentierande medium: Peptonet gynnar tillväxten av svamp. pH-indikatorn fenolrött visar alkalisk reaktion (rosaröd

färg) då urea p.g.a. ureasaktivitet omvandlas till ammoniak.

Medium/Substrat Basmedium:

  • Ingående komponenter
    • Mycological Peptone, Oxoid L 40----- 1 g
    • Glukos ----- 1 g
    • Natriumklorid, NaCl, p.a. ----- 5 g
    • Dinatriumvätefosfat, Na2HPO4 x 2 H2O, p.a. ----- 1,5 g
    • Kaliumdivätefosfat, KH2PO4, p.a. ----- 0,8 g
    • Fenolrött ----- 0,012 g
    • Agar No 3, Oxoid L 13 ----- 12 g
    • Ultrarent vatten ----- 1000 mL

pH 6,8 + 0,2 vid 25 °C


Slutlig blandning

  • Basmedium, autoklaverat ----- 200 mL
  • Urea, 40 %, sterilfitrerad ----- 10 mL/200 mL medium


Beredning

  • Basmedium
    • 1. Blanda alla ingredienser med vattnet i kolven.
    • 2. Lös genom omskakning och kokning.
    • 3. Autoklavera 15 min vid 121°C
  • Efter autoklavering
    • 4. Efter autoklavering eller smältning och då mediet tempererats till 50°C tillsättes urealösningen sterilt.



Yeast Nitrogen Base (YNB)-agar med asparagin och glukos modifierad enligt Shadomy[redigera]

Indikation

  • Resistensbestämning av jästsvamp med diskdiffusion.

Princip

  • Yeast Nitrogen Base (YNB) innehåller små mängder aminosyror, vitaminer och spårelement då vissa svampar saknar förmåga att syntetisera dessa. För att få bättre tillväxt vid resistensbestämning har tillsatts asparagin som en lättillgänglig kvävekälla samt glukos som kol- och energikälla. Kloramfenikol hämmar bakterieväxt.

Medium/Substrat

  • Ingående komponenter
    • Natriumfosfatbuffert, pH 7,0; 0,01 mol/L, autoklaverad (se recept nedan)----- 675 mL
    • Agar No 1 Oxoid L11 ----- 7.5 g
    • YNB-buljong 6,7 % sterilfiltrerad (se recept nedan)----- 75 mL
    • Kloramfenikol ----- 75 mg

pH 7,0+0,2 vid 25°C


Beredning

  • Lös agar i fosfatbuffert i en kolv genom skakning och kokning.
  • Autoklavera 15 min vid 121 °C
  • Temperera lösningen till 50 °C
  • Tillsätt YNB-buljongen
  • Tillsätt kloramfenikol
  • Gjut plattor 20-22 mL per skål.



Fosfatbuffert till YNB-agar pH 7,0[redigera]

  • Ingredienser
    • Natriumdivätefosfat p.a. NaH2PO4xH2O ----- 0,43 g

Dikaliumvätefosfat p.a. K2HPO4 ----- 0,85 g Destillerat/avjoniserat H2O till ----- 1000 mL


Beredning

  • Lös fosfaterna i nästan hela vattenmängden under magnetomrörning.
  • Justera pH till 7,0 med syra eller bas
  • Justera slutvolymen med vatten och dispensera på flaskor som autoklaveras 15 min 121 °C.

Förvaring Kyl 2-8°C, upp till 1 år


YNB-buljong[redigera]

  • Kemikalier
    • Yeast Nitrogen Base, Difco ----- 67 g
    • L-asparagin, p.a. ----- 15 g
    • Glukos, p.a. ----- 100 g

Destillerat/avjoniserat H2O upp till ----- 1000 mL


Beredning

  • Väg upp substanserna i 1000 mL bägare och lös i ca 800 mL vatten med magnetomrörning.
  • Häll i mätkolven och justera med vatten till 1000 mL.
  • Sterilfiltrera (Ultrafilter 0,2 m, MediaKap®-5) direkt ned i sterila 100 mL flaskor.

Förvaring: Kyl 2-8 °C upp till 6 månader.

Hämtad från "http://referensmetodik.folkhalsomyndigheten.se/index.php?title=3._Referenssubstrat-svamp&oldid=6484"