Skillnad mellan versioner av "Bilaga 6 Mykobakterier; substrat-och reagensrecept"
Hoppa till navigering
Hoppa till sök
(Skapade sidan med 'Sekundärartikel till ''Tuberkulos-laboratoriediagnostik'' ---- Mykobakterier; substrat- och reagensrecept Löwenstein-Jensen medium (OBS! 3 tillverkningsdagar) Dag 1 ...') |
|||
Rad 1: | Rad 1: | ||
Sekundärartikel till ''[[Tuberkulos-laboratoriediagnostik]]'' | Sekundärartikel till ''[[Tuberkulos-laboratoriediagnostik]]'' | ||
− | |||
---- | ---- | ||
+ | == Mykobakterier; substrat- och reagensrecept == | ||
+ | === Löwenstein-Jensen medium === | ||
− | |||
− | |||
− | |||
(OBS! 3 tillverkningsdagar) | (OBS! 3 tillverkningsdagar) | ||
− | Dag 1 | + | *Dag 1 |
− | 1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan). | + | **1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan). |
− | Dag 2 | + | *Dag 2 |
− | 1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar. | + | **1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar. |
− | 2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar). | + | **2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar). |
− | 3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar. | + | **3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar. |
− | 4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten. | + | **4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten. |
− | Dag 3 | + | *Dag 3 |
− | 1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter. | + | **1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter. |
− | 2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts. | + | **2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts. |
− | 3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter. | + | **3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter. |
− | 4. Dispenseras i sterila odlingsrör. | + | **4. Dispenseras i sterila odlingsrör. |
− | 5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme. | + | **5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme. |
− | Lutlösning | + | '''Lutlösning''': Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsätt ≈ 100 mL lutpastiller NaOH, som får lösa sig till följande dag. OBS! Glasögon och handskar måste användas vid hanteringen av lutlösningen. |
− | Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsätt ≈ 100 mL lutpastiller NaOH, som får lösa sig till följande dag. OBS! Glasögon och handskar måste användas vid hanteringen av lutlösningen. | ||
− | Saltlösning | + | *'''Saltlösning''' |
− | Kalium-di-vätefosfat KH2PO4 3,2 g | + | **Kalium-di-vätefosfat KH2PO4 3,2 g |
− | Magnesiumfosfat MgSO4x7H2O 0,32 g | + | **Magnesiumfosfat MgSO4x7H2O 0,32 g |
− | Tri-Magnesium-dicitrat C12H10Mg3O14x14 H2O 0,8 g | + | **Tri-Magnesium-dicitrat C12H10Mg3O14x14 H2O 0,8 g |
− | L-Aspargin 4,8 g | + | **L-Aspargin 4,8 g |
− | Glycerol 16,0 mL | + | **Glycerol 16,0 mL |
− | 1 M HCl 50,0 mL | + | **1 M HCl 50,0 mL |
− | Avjoniserat vatten 700,0 mL | + | **Avjoniserat vatten 700,0 mL |
+ | |||
+ | *1. Saltlösningen vägs upp i 1500 mL E-kolv. | ||
+ | *2. Värms till nästan kokpunkt. | ||
+ | *3. 40 g potatisstärkelse löses i 100 mL avjoniserat vatten. | ||
+ | *4. Stärkelselösningen tillsätts under omskakning. | ||
+ | *5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ºC. | ||
+ | *6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur. | ||
− | + | *'''Malakitgrönt 2 % lösning''' | |
− | 2 | + | **Malakitgrönt-oxalat 3,0 g |
− | 3 | + | **Avjoniserat vatten 150 mL |
− | |||
− | |||
− | |||
− | + | *1. Malakitgrönt-oxalat vägs upp i 300 mL glasflaska. | |
− | Malakitgrönt-oxalat | + | *2. Avjoniserat vatten tillsätts. |
− | Avjoniserat vatten | + | *3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten. |
+ | *4. Flaskan skakas då och då tills pulvret gått i lösning. | ||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | Reagens för dekontaminering av prov | + | === Reagens för dekontaminering av prov === |
− | Natriumlaurylsulfatlösning | + | |
− | Natrium laurylsulfat 99,9 % 45 g | + | *'''Natriumlaurylsulfatlösning''' |
− | Avjoniserat vatten 1500 mL | + | **Natrium laurylsulfat 99,9 % 45 g |
− | Natriumhydroxid, NaOH 15 g | + | **Avjoniserat vatten 1500 mL |
+ | **Natriumhydroxid, NaOH 15 g | ||
Laurylsulfatet löses i ca 60 ºC vatten, NaOH tillsätts innan utfällningen börjar. Använd mycket rena kärl. Fylls med ca 750 mL på 1 liters flaskor och autoklaveras i 120 ºC i 20 min. Ställs i 37 ºC termostat snarast. | Laurylsulfatet löses i ca 60 ºC vatten, NaOH tillsätts innan utfällningen börjar. Använd mycket rena kärl. Fylls med ca 750 mL på 1 liters flaskor och autoklaveras i 120 ºC i 20 min. Ställs i 37 ºC termostat snarast. | ||
− | Neutralisationslösning för dekontaminering | + | |
− | Svavelsyra H2SO4 konc. (98 %) 0,9 mL | + | * '''Neutralisationslösning för dekontaminering''' |
− | Avjoniserat vatten 1000 mL | + | **Svavelsyra H2SO4 konc. (98 %) 0,9 mL |
− | Bromkresolpurpur 1 % 0,8 mL | + | **Avjoniserat vatten 1000 mL |
+ | **Bromkresolpurpur 1 % 0,8 mL | ||
Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 º C i 20 minuter. | Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 º C i 20 minuter. | ||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
+ | === Reagens för fluorescensmikroskopi === | ||
− | Syra-alkohol lösning. 3,0 mL koncentrerad HCl adderas långsamt till 97,0 mL 90-95 % etanol (stark värme kan utvecklas). | + | *'''Auramin''' |
+ | **Auramin 3,0 g | ||
+ | **Fenol 32 mL | ||
+ | **H2O 968 mL | ||
+ | |||
+ | |||
+ | *'''Syra-alkohol lösning.''' | ||
+ | **3,0 mL koncentrerad HCl adderas långsamt till 97,0 mL 90-95 % etanol (stark värme kan utvecklas). | ||
+ | |||
+ | |||
+ | === Reagens för Hallbergfärgning === | ||
+ | |||
+ | *'''Stamlösningar''' | ||
+ | **Nachtblaulösning | ||
+ | **Nachtblau 5 g | ||
+ | *** 95 % alkohol 100 mL | ||
+ | **K2SO4-lösning K2SO4 4 g | ||
+ | *** Aq dest 100 g | ||
+ | *'''Brukslösningar ''' | ||
+ | **Nachtblaulösning, bruks | ||
+ | **Aq dest 405 mL | ||
+ | ** K2SO4-lösning 4,5 mL | ||
+ | ** Nachtblaulösning 45 mL | ||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
Nachtblaulösning måste efter hopblandningen upphettas till 75 º-80 ºC innan den används. | Nachtblaulösning måste efter hopblandningen upphettas till 75 º-80 ºC innan den används. | ||
− | Fuchsinlösning Fuchsin 1 g | + | |
− | (för kontrastfärgning) 70 % alkohol 1000 mL | + | *'''Fuchsinlösning ''' |
+ | **Fuchsin 1 g | ||
+ | **(för kontrastfärgning) 70 % alkohol 1000 mL | ||
− | PANTA | + | *'''PANTA''' |
+ | |||
+ | **Polymyxin B 50 enheter/mL | ||
+ | **Amfotericin 5 mg/L | ||
+ | **Nalixidinsyra 20 mg/L | ||
+ | **Trimetoprim 5 mg/L | ||
+ | **Azlocillin 10 mg/L | ||
+ | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
− | |||
Färdig lösning kan köpas från Becton Dickinson. | Färdig lösning kan köpas från Becton Dickinson. | ||
[[Kategori:Laboratoriediagnostik-Nedre luftvägsinfektioner]] | [[Kategori:Laboratoriediagnostik-Nedre luftvägsinfektioner]] |
Versionen från 21 november 2009 kl. 21.55
Sekundärartikel till Tuberkulos-laboratoriediagnostik
Mykobakterier; substrat- och reagensrecept
Löwenstein-Jensen medium
(OBS! 3 tillverkningsdagar)
- Dag 1
- 1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan).
- Dag 2
- 1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar.
- 2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar).
- 3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar.
- 4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten.
- Dag 3
- 1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter.
- 2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts.
- 3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter.
- 4. Dispenseras i sterila odlingsrör.
- 5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme.
Lutlösning: Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsätt ≈ 100 mL lutpastiller NaOH, som får lösa sig till följande dag. OBS! Glasögon och handskar måste användas vid hanteringen av lutlösningen.
- Saltlösning
- Kalium-di-vätefosfat KH2PO4 3,2 g
- Magnesiumfosfat MgSO4x7H2O 0,32 g
- Tri-Magnesium-dicitrat C12H10Mg3O14x14 H2O 0,8 g
- L-Aspargin 4,8 g
- Glycerol 16,0 mL
- 1 M HCl 50,0 mL
- Avjoniserat vatten 700,0 mL
- 1. Saltlösningen vägs upp i 1500 mL E-kolv.
- 2. Värms till nästan kokpunkt.
- 3. 40 g potatisstärkelse löses i 100 mL avjoniserat vatten.
- 4. Stärkelselösningen tillsätts under omskakning.
- 5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ºC.
- 6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur.
- Malakitgrönt 2 % lösning
- Malakitgrönt-oxalat 3,0 g
- Avjoniserat vatten 150 mL
- 1. Malakitgrönt-oxalat vägs upp i 300 mL glasflaska.
- 2. Avjoniserat vatten tillsätts.
- 3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten.
- 4. Flaskan skakas då och då tills pulvret gått i lösning.
Reagens för dekontaminering av prov
- Natriumlaurylsulfatlösning
- Natrium laurylsulfat 99,9 % 45 g
- Avjoniserat vatten 1500 mL
- Natriumhydroxid, NaOH 15 g
Laurylsulfatet löses i ca 60 ºC vatten, NaOH tillsätts innan utfällningen börjar. Använd mycket rena kärl. Fylls med ca 750 mL på 1 liters flaskor och autoklaveras i 120 ºC i 20 min. Ställs i 37 ºC termostat snarast.
- Neutralisationslösning för dekontaminering
- Svavelsyra H2SO4 konc. (98 %) 0,9 mL
- Avjoniserat vatten 1000 mL
- Bromkresolpurpur 1 % 0,8 mL
Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 º C i 20 minuter.
Reagens för fluorescensmikroskopi
- Auramin
- Auramin 3,0 g
- Fenol 32 mL
- H2O 968 mL
- Syra-alkohol lösning.
- 3,0 mL koncentrerad HCl adderas långsamt till 97,0 mL 90-95 % etanol (stark värme kan utvecklas).
Reagens för Hallbergfärgning
- Stamlösningar
- Nachtblaulösning
- Nachtblau 5 g
- 95 % alkohol 100 mL
- K2SO4-lösning K2SO4 4 g
- Aq dest 100 g
- Brukslösningar
- Nachtblaulösning, bruks
- Aq dest 405 mL
- K2SO4-lösning 4,5 mL
- Nachtblaulösning 45 mL
Nachtblaulösning måste efter hopblandningen upphettas till 75 º-80 ºC innan den används.
- Fuchsinlösning
- Fuchsin 1 g
- (för kontrastfärgning) 70 % alkohol 1000 mL
- PANTA
- Polymyxin B 50 enheter/mL
- Amfotericin 5 mg/L
- Nalixidinsyra 20 mg/L
- Trimetoprim 5 mg/L
- Azlocillin 10 mg/L
Färdig lösning kan köpas från Becton Dickinson.