Skillnad mellan versioner av "Bilaga 6 Mykobakterier; substrat-och reagensrecept"
Hoppa till navigering
Hoppa till sök
Rad 9: | Rad 9: | ||
(OBS! 3 tillverkningsdagar) | (OBS! 3 tillverkningsdagar) | ||
− | *Dag 1 | + | *'''Dag 1''' |
**1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan). | **1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan). | ||
− | *Dag 2 | + | *'''Dag 2''' |
**1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar. | **1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar. | ||
**2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar). | **2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar). | ||
**3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar. | **3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar. | ||
**4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten. | **4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten. | ||
− | *Dag 3 | + | *'''Dag 3''' |
**1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter. | **1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter. | ||
**2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts. | **2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts. | ||
Rad 49: | Rad 49: | ||
*3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten. | *3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten. | ||
*4. Flaskan skakas då och då tills pulvret gått i lösning. | *4. Flaskan skakas då och då tills pulvret gått i lösning. | ||
− | |||
− | |||
=== Reagens för dekontaminering av prov === | === Reagens för dekontaminering av prov === |
Versionen från 21 november 2009 kl. 21.55
Sekundärartikel till Tuberkulos-laboratoriediagnostik
Mykobakterier; substrat- och reagensrecept
Löwenstein-Jensen medium
(OBS! 3 tillverkningsdagar)
- Dag 1
- 1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan).
- Dag 2
- 1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar.
- 2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar).
- 3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar.
- 4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten.
- Dag 3
- 1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter.
- 2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts.
- 3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter.
- 4. Dispenseras i sterila odlingsrör.
- 5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme.
Lutlösning: Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsätt ≈ 100 mL lutpastiller NaOH, som får lösa sig till följande dag. OBS! Glasögon och handskar måste användas vid hanteringen av lutlösningen.
- Saltlösning
- Kalium-di-vätefosfat KH2PO4 3,2 g
- Magnesiumfosfat MgSO4x7H2O 0,32 g
- Tri-Magnesium-dicitrat C12H10Mg3O14x14 H2O 0,8 g
- L-Aspargin 4,8 g
- Glycerol 16,0 mL
- 1 M HCl 50,0 mL
- Avjoniserat vatten 700,0 mL
- 1. Saltlösningen vägs upp i 1500 mL E-kolv.
- 2. Värms till nästan kokpunkt.
- 3. 40 g potatisstärkelse löses i 100 mL avjoniserat vatten.
- 4. Stärkelselösningen tillsätts under omskakning.
- 5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ºC.
- 6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur.
- Malakitgrönt 2 % lösning
- Malakitgrönt-oxalat 3,0 g
- Avjoniserat vatten 150 mL
- 1. Malakitgrönt-oxalat vägs upp i 300 mL glasflaska.
- 2. Avjoniserat vatten tillsätts.
- 3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten.
- 4. Flaskan skakas då och då tills pulvret gått i lösning.
Reagens för dekontaminering av prov
- Natriumlaurylsulfatlösning
- Natrium laurylsulfat 99,9 % 45 g
- Avjoniserat vatten 1500 mL
- Natriumhydroxid, NaOH 15 g
Laurylsulfatet löses i ca 60 ºC vatten, NaOH tillsätts innan utfällningen börjar. Använd mycket rena kärl. Fylls med ca 750 mL på 1 liters flaskor och autoklaveras i 120 ºC i 20 min. Ställs i 37 ºC termostat snarast.
- Neutralisationslösning för dekontaminering
- Svavelsyra H2SO4 konc. (98 %) 0,9 mL
- Avjoniserat vatten 1000 mL
- Bromkresolpurpur 1 % 0,8 mL
Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 º C i 20 minuter.
Reagens för fluorescensmikroskopi
- Auramin
- Auramin 3,0 g
- Fenol 32 mL
- H2O 968 mL
- Syra-alkohol lösning.
- 3,0 mL koncentrerad HCl adderas långsamt till 97,0 mL 90-95 % etanol (stark värme kan utvecklas).
Reagens för Hallbergfärgning
- Stamlösningar
- Nachtblaulösning
- Nachtblau 5 g
- 95 % alkohol 100 mL
- K2SO4-lösning K2SO4 4 g
- Aq dest 100 g
- Brukslösningar
- Nachtblaulösning, bruks
- Aq dest 405 mL
- K2SO4-lösning 4,5 mL
- Nachtblaulösning 45 mL
Nachtblaulösning måste efter hopblandningen upphettas till 75 º-80 ºC innan den används.
- Fuchsinlösning
- Fuchsin 1 g
- (för kontrastfärgning) 70 % alkohol 1000 mL
- PANTA
- Polymyxin B 50 enheter/mL
- Amfotericin 5 mg/L
- Nalixidinsyra 20 mg/L
- Trimetoprim 5 mg/L
- Azlocillin 10 mg/L
Färdig lösning kan köpas från Becton Dickinson.