Skillnad mellan versioner av "Bilaga 6 Mykobakterier; substrat-och reagensrecept"

Från Referensmetodik för laboratoriediagnostik
Hoppa till navigering Hoppa till sök
(Skapade sidan med 'Sekundärartikel till ''Tuberkulos-laboratoriediagnostik'' ---- Mykobakterier; substrat- och reagensrecept Löwenstein-Jensen medium (OBS! 3 tillverkningsdagar) Dag 1 ...')
 
 
(8 mellanliggande sidversioner av samma användare visas inte)
Rad 1: Rad 1:
 
Sekundärartikel till ''[[Tuberkulos-laboratoriediagnostik]]''
 
Sekundärartikel till ''[[Tuberkulos-laboratoriediagnostik]]''
−
 
  
 
----
 
----
  
 +
== Mykobakterier; substrat- och reagensrecept ==
  
  
 +
=== Löwenstein-Jensen medium ===
  
−
Mykobakterier; substrat- och reagensrecept
+
(OBS! 3 tillverkningsdagar)
 +
*'''Dag 1'''
 +
**1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan).
 +
*'''Dag 2'''
 +
**1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar.
 +
**2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar).
 +
**3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar.
 +
**4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten.
 +
*'''Dag 3'''
 +
**1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter.
 +
**2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts.
 +
**3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter.
 +
**4. Dispenseras i sterila odlingsrör.
 +
**5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme.
 +
  
−
Löwenstein-Jensen medium
+
*'''Lutlösning''':
−
(OBS! 3 tillverkningsdagar)
+
**Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsätt
−
Dag 1
+
***≈ 100 mL lutpastiller NaOH, som får lösa sig till följande dag.  
−
1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan).
 
−
Dag 2
 
−
1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar.
 
−
2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar).
 
−
3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar.
 
−
4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten.
 
−
Dag 3
 
−
1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter.
 
−
2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts.
 
−
3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter.
 
−
4. Dispenseras i sterila odlingsrör.
 
−
5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme.
 
  
−
Lutlösning
+
OBS! Glasögon och handskar måste användas vid hanteringen av lutlösningen.
−
Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsätt ≈ 100 mL lutpastiller NaOH, som får lösa sig till följande dag. OBS! Glasögon och handskar måste användas vid hanteringen av lutlösningen.
 
 
   
 
   
−
Saltlösning
+
*'''Saltlösning'''
−
Kalium-di-vätefosfat KH2PO4 3,2 g
+
**Kalium-di-vätefosfat KH<SUB>2</SUB>PO<SUB>4</SUB> ---- 3,2 g
−
Magnesiumfosfat MgSO4x7H2O 0,32 g
+
**Magnesiumfosfat MgSO<SUB>4</SUB>x7H<sub>2</sub>O ---- 0,32 g
−
Tri-Magnesium-dicitrat C12H10Mg3O14x14 H2O 0,8 g
+
**Tri-Magnesium-dicitrat C<SUB>12</SUB>H<SUB>10</SUB>Mg<SUB>3</SUB>O<SUB>14</SUB>x14 H<sub>2</sub>O ---- 0,8 g
−
L-Aspargin 4,8 g
+
**L-Aspargin ---- 4,8 g
−
Glycerol 16,0 mL
+
**Glycerol ---- 16,0 mL
−
1 M HCl 50,0 mL
+
**1 M HCl ---- 50,0 mL
−
Avjoniserat vatten 700,0 mL
+
**Avjoniserat vatten ---- 700,0 mL
 +
 
 +
*1. Saltlösningen vägs upp i 1500 mL E-kolv.
 +
*2. Värms till nästan kokpunkt.
 +
*3. 40 g potatisstärkelse löses i 100 mL avjoniserat vatten.
 +
*4. Stärkelselösningen tillsätts under omskakning.
 +
*5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ºC.
 +
*6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur.
 +
 
 +
 
 +
*'''Malakitgrönt 2 % lösning'''
 +
**Malakitgrönt-oxalat ---- 3,0 g
 +
**Avjoniserat vatten ---- 150 mL
 +
 
 +
*1. Malakitgrönt-oxalat vägs upp i 300 mL glasflaska.
 +
*2. Avjoniserat vatten tillsätts.
 +
*3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten.
 +
*4. Flaskan skakas då och då tills pulvret gått i lösning.
  
−
1. Saltlösningen vägs upp i 1500 mL E-kolv.
+
=== Reagens för dekontaminering av prov ===
−
2. Värms till nästan kokpunkt.
 
−
3. 40 g potatisstärkelse löses i 100 mL avjoniserat vatten.
 
−
4. Stärkelselösningen tillsätts under omskakning.
 
−
5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ºC.
 
−
6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur.
 
  
−
Malakitgrönt 2 % lösning
+
*NALC och NaOH
−
Malakitgrönt-oxalat 3,0 g
+
** A. 4% NaOH ----- 500 mL
−
Avjoniserat vatten 150 mL
+
** B. 2.9 % natriumcitrat dihydrat eller 2.6 % vattenfri natriumcitrat ----- 500 mL
 +
** C. NALC (tillverka dagligen) ----- 5 g  
 +
** D. pH 6,8 fosfatbuffert (eller sterilt destillerat vatten)
  
−
1. Malakitgrönt-oxalat vägs upp i 300 mL glasflaska.
+
Blanda A och B, sterilisera och förvara för användning senare. Tillsätt reagens C strax innan användning. Förbrukas inom 24 timmar.  
−
2. Avjoniserat vatten tillsätts.
 
−
3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten.
 
−
4. Flaskan skakas då och då tills pulvret gått i lösning.
 
  
  
−
Reagens för dekontaminering av prov
+
*'''Natriumlaurylsulfatlösning'''
−
Natriumlaurylsulfatlösning
+
**Natrium laurylsulfat 99,9 % ---- 45 g
−
Natrium laurylsulfat 99,9 % 45 g
+
**Avjoniserat vatten ---- 1500 mL
−
Avjoniserat vatten 1500 mL
+
**Natriumhydroxid, NaOH ---- 15 g
−
Natriumhydroxid, NaOH 15 g
 
  
 
Laurylsulfatet löses i ca 60 ºC vatten, NaOH tillsätts innan utfällningen börjar. Använd mycket rena kärl. Fylls med ca 750 mL på 1 liters flaskor och autoklaveras i 120 ºC i 20 min. Ställs i 37 ºC termostat snarast.
 
Laurylsulfatet löses i ca 60 ºC vatten, NaOH tillsätts innan utfällningen börjar. Använd mycket rena kärl. Fylls med ca 750 mL på 1 liters flaskor och autoklaveras i 120 ºC i 20 min. Ställs i 37 ºC termostat snarast.
  
 
   
 
   
−
Neutralisationslösning för dekontaminering
 
−
Svavelsyra H2SO4 konc. (98 %) 0,9 mL
 
−
Avjoniserat vatten 1000 mL
 
−
Bromkresolpurpur 1 % 0,8 mL
 
  
−
Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 º C i 20 minuter.
+
* '''Neutralisationslösning för dekontaminering'''
 +
**Svavelsyra H<SUB>2</SUB>SO<SUB>4</SUB> konc. (98 %)---- 0,9 mL
 +
**Avjoniserat vatten ---- 1000 mL
 +
**Bromkresolpurpur 1 % ---- 0,8 mL
 +
 
 +
Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 ºC i 20 minuter.
 +
 
 +
=== Reagens för fluorescensmikroskopi ===
 +
 
 +
*'''Auramin'''
 +
**Auramin ---- 3,0 g
 +
**Fenol ---- 32 mL
 +
**H<sub>2</sub>O ---- 968 mL
 +
 
 +
 
 +
*'''Syra-alkohol lösning.'''
 +
**3,0 mL koncentrerad HCl adderas långsamt till 97,0 mL 90-95 % etanol (stark värme kan utvecklas).
 +
 
  
−
Reagens för fluorescensmikroskopi
+
=== Reagens för Hallbergfärgning ===
−
Auramin
 
−
Auramin 3,0 g
 
−
Fenol 32 mL
 
−
H2O 968 mL
 
  
  
−
Syra-alkohol lösning. 3,0 mL koncentrerad HCl adderas långsamt till 97,0 mL 90-95 % etanol (stark värme kan utvecklas).
+
*'''Stamlösningar'''
 +
**Nachtblaulösning
 +
**Nachtblau ---- 5 g
 +
*** 95 % alkohol ---- 100 mL
 +
**K<SUB>2</SUB>SO<SUB>4</SUB>-lösning K<SUB>2</SUB>SO<SUB>4</SUB> ---- 4 g
 +
*** Aq dest ---- 100 g
 +
*'''Brukslösningar '''
 +
**Nachtblaulösning, bruks
 +
**Aq dest ---- 405 mL
 +
** K<SUB>2</SUB>SO<SUB>4</SUB> -lösning ---- 4,5 mL
 +
** Nachtblaulösning ---- 45 mL
  
−
Reagens för Hallbergfärgning
 
−
Stamlösningar
 
−
Nachtblaulösning Nachtblau 5 g
 
−
95 % alkohol 100 mL
 
−
K2SO4-lösning K2SO4 4 g
 
−
Aq dest 100 g
 
−
Brukslösningar
 
−
Nachtblaulösning Aq dest 405 mL
 
−
K2SO4-lösning 4,5 mL
 
−
Nachtblaulösning 45 mL
 
 
Nachtblaulösning måste efter hopblandningen upphettas till 75 º-80 ºC innan den används.
 
Nachtblaulösning måste efter hopblandningen upphettas till 75 º-80 ºC innan den används.
−
Fuchsinlösning Fuchsin 1 g
+
 
−
(för kontrastfärgning) 70 % alkohol 1000 mL
+
*'''Fuchsinlösning '''
 +
**Fuchsin ---- 1 g
 +
**(för kontrastfärgning) 70 % alkohol ---- 1000 mL
  
  
 
      
 
      
−
PANTA
+
*'''PANTA'''
 +
 
 +
**Polymyxin B ---- 50 enheter/mL
 +
**Amfotericin ---- 5 mg/L
 +
**Nalixidinsyra ---- 20 mg/L
 +
**Trimetoprim ---- 5 mg/L
 +
**Azlocillin ---- 10 mg/L
 +
 
  
−
Polymyxin B 50 enheter/mL
 
−
Amfotericin 5 mg/L
 
−
Nalixidinsyra 20 mg/L
 
−
Trimetoprim 5 mg/L
 
−
Azlocillin 10 mg/L
 
 
Färdig lösning kan köpas från Becton Dickinson.
 
Färdig lösning kan köpas från Becton Dickinson.
 
[[Kategori:Laboratoriediagnostik-Nedre luftvägsinfektioner]]
 
[[Kategori:Laboratoriediagnostik-Nedre luftvägsinfektioner]]

Nuvarande version från 31 januari 2010 kl. 16.59

Sekundärartikel till Tuberkulos-laboratoriediagnostik

Mykobakterier; substrat- och reagensrecept[redigera]

Löwenstein-Jensen medium[redigera]

(OBS! 3 tillverkningsdagar)

  • Dag 1
    • 1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan).
  • Dag 2
    • 1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar.
    • 2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar).
    • 3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar.
    • 4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten.
  • Dag 3
    • 1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter.
    • 2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts.
    • 3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter.
    • 4. Dispenseras i sterila odlingsrör.
    • 5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme.


  • Lutlösning:
    • Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsätt
      • ≈ 100 mL lutpastiller NaOH, som får lösa sig till följande dag.

OBS! Glasögon och handskar måste användas vid hanteringen av lutlösningen.

  • Saltlösning
    • Kalium-di-vätefosfat KH2PO4 ---- 3,2 g
    • Magnesiumfosfat MgSO4x7H2O ---- 0,32 g
    • Tri-Magnesium-dicitrat C12H10Mg3O14x14 H2O ---- 0,8 g
    • L-Aspargin ---- 4,8 g
    • Glycerol ---- 16,0 mL
    • 1 M HCl ---- 50,0 mL
    • Avjoniserat vatten ---- 700,0 mL
  • 1. Saltlösningen vägs upp i 1500 mL E-kolv.
  • 2. Värms till nästan kokpunkt.
  • 3. 40 g potatisstärkelse löses i 100 mL avjoniserat vatten.
  • 4. Stärkelselösningen tillsätts under omskakning.
  • 5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ºC.
  • 6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur.


  • Malakitgrönt 2 % lösning
    • Malakitgrönt-oxalat ---- 3,0 g
    • Avjoniserat vatten ---- 150 mL
  • 1. Malakitgrönt-oxalat vägs upp i 300 mL glasflaska.
  • 2. Avjoniserat vatten tillsätts.
  • 3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten.
  • 4. Flaskan skakas då och då tills pulvret gått i lösning.

Reagens för dekontaminering av prov[redigera]

  • NALC och NaOH
    • A. 4% NaOH ----- 500 mL
    • B. 2.9 % natriumcitrat dihydrat eller 2.6 % vattenfri natriumcitrat ----- 500 mL
    • C. NALC (tillverka dagligen) ----- 5 g
    • D. pH 6,8 fosfatbuffert (eller sterilt destillerat vatten)

Blanda A och B, sterilisera och förvara för användning senare. Tillsätt reagens C strax innan användning. Förbrukas inom 24 timmar.


  • Natriumlaurylsulfatlösning
    • Natrium laurylsulfat 99,9 % ---- 45 g
    • Avjoniserat vatten ---- 1500 mL
    • Natriumhydroxid, NaOH ---- 15 g

Laurylsulfatet löses i ca 60 ºC vatten, NaOH tillsätts innan utfällningen börjar. Använd mycket rena kärl. Fylls med ca 750 mL på 1 liters flaskor och autoklaveras i 120 ºC i 20 min. Ställs i 37 ºC termostat snarast.


  • Neutralisationslösning för dekontaminering
    • Svavelsyra H2SO4 konc. (98 %)---- 0,9 mL
    • Avjoniserat vatten ---- 1000 mL
    • Bromkresolpurpur 1 % ---- 0,8 mL

Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 ºC i 20 minuter.

Reagens för fluorescensmikroskopi[redigera]

  • Auramin
    • Auramin ---- 3,0 g
    • Fenol ---- 32 mL
    • H2O ---- 968 mL


  • Syra-alkohol lösning.
    • 3,0 mL koncentrerad HCl adderas långsamt till 97,0 mL 90-95 % etanol (stark värme kan utvecklas).


Reagens för Hallbergfärgning[redigera]

  • Stamlösningar
    • Nachtblaulösning
    • Nachtblau ---- 5 g
      • 95 % alkohol ---- 100 mL
    • K2SO4-lösning K2SO4 ---- 4 g
      • Aq dest ---- 100 g
  • Brukslösningar
    • Nachtblaulösning, bruks
    • Aq dest ---- 405 mL
    • K2SO4 -lösning ---- 4,5 mL
    • Nachtblaulösning ---- 45 mL

Nachtblaulösning måste efter hopblandningen upphettas till 75 º-80 ºC innan den används.

  • Fuchsinlösning
    • Fuchsin ---- 1 g
    • (för kontrastfärgning) 70 % alkohol ---- 1000 mL


  • PANTA
    • Polymyxin B ---- 50 enheter/mL
    • Amfotericin ---- 5 mg/L
    • Nalixidinsyra ---- 20 mg/L
    • Trimetoprim ---- 5 mg/L
    • Azlocillin ---- 10 mg/L


Färdig lösning kan köpas från Becton Dickinson.

Hämtad från "http://referensmetodik.folkhalsomyndigheten.se/index.php?title=Bilaga_6_Mykobakterier;_substrat-och_reagensrecept&oldid=6029"