Skillnad mellan versioner av "Bilaga 6 Mykobakterier; substrat-och reagensrecept"
Hoppa till navigering
Hoppa till sök
(2 mellanliggande sidversioner av samma användare visas inte) | |||
Rad 21: | Rad 21: | ||
**3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter. | **3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter. | ||
**4. Dispenseras i sterila odlingsrör. | **4. Dispenseras i sterila odlingsrör. | ||
− | **5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme. | + | **5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme. |
+ | |||
*'''Lutlösning''': | *'''Lutlösning''': | ||
Rad 44: | Rad 45: | ||
*5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ºC. | *5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ºC. | ||
*6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur. | *6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur. | ||
+ | |||
*'''Malakitgrönt 2 % lösning''' | *'''Malakitgrönt 2 % lösning''' | ||
Rad 55: | Rad 57: | ||
=== Reagens för dekontaminering av prov === | === Reagens för dekontaminering av prov === | ||
+ | |||
+ | *NALC och NaOH | ||
+ | ** A. 4% NaOH ----- 500 mL | ||
+ | ** B. 2.9 % natriumcitrat dihydrat eller 2.6 % vattenfri natriumcitrat ----- 500 mL | ||
+ | ** C. NALC (tillverka dagligen) ----- 5 g | ||
+ | ** D. pH 6,8 fosfatbuffert (eller sterilt destillerat vatten) | ||
+ | |||
+ | Blanda A och B, sterilisera och förvara för användning senare. Tillsätt reagens C strax innan användning. Förbrukas inom 24 timmar. | ||
+ | |||
*'''Natriumlaurylsulfatlösning''' | *'''Natriumlaurylsulfatlösning''' | ||
Rad 71: | Rad 82: | ||
Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 ºC i 20 minuter. | Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 ºC i 20 minuter. | ||
− | |||
=== Reagens för fluorescensmikroskopi === | === Reagens för fluorescensmikroskopi === | ||
Rad 86: | Rad 96: | ||
=== Reagens för Hallbergfärgning === | === Reagens för Hallbergfärgning === | ||
+ | |||
*'''Stamlösningar''' | *'''Stamlösningar''' | ||
Rad 91: | Rad 102: | ||
**Nachtblau ---- 5 g | **Nachtblau ---- 5 g | ||
*** 95 % alkohol ---- 100 mL | *** 95 % alkohol ---- 100 mL | ||
− | **K<SUB>2</SUB>SO<SUB>4</ | + | **K<SUB>2</SUB>SO<SUB>4</SUB>-lösning K<SUB>2</SUB>SO<SUB>4</SUB> ---- 4 g |
*** Aq dest ---- 100 g | *** Aq dest ---- 100 g | ||
*'''Brukslösningar ''' | *'''Brukslösningar ''' | ||
**Nachtblaulösning, bruks | **Nachtblaulösning, bruks | ||
**Aq dest ---- 405 mL | **Aq dest ---- 405 mL | ||
− | ** K<SUB>2</SUB>SO<SUB>4</SUB>-lösning ---- 4,5 mL | + | ** K<SUB>2</SUB>SO<SUB>4</SUB> -lösning ---- 4,5 mL |
** Nachtblaulösning ---- 45 mL | ** Nachtblaulösning ---- 45 mL | ||
Nuvarande version från 31 januari 2010 kl. 16.59
Sekundärartikel till Tuberkulos-laboratoriediagnostik
Mykobakterier; substrat- och reagensrecept[redigera]
Löwenstein-Jensen medium[redigera]
(OBS! 3 tillverkningsdagar)
- Dag 1
- 1. Lutlösning, saltlösning och malakitgröntlösning prepareras (se nedan).
- Dag 2
- 1. Ägg (32 st per hel sats) placeras i hinkar.
- 2. Lutlösningen hälls över äggen (glasögon och handskar).
- 3. Efter 3 timmar hälls lutlösningen av, varefter äggen sköljs med rinnande vatten i 4 timmar.
- 4. Vattnet hälls av och äggen får stå i kyl 4 ºC över natten.
- Dag 3
- 1. Äggen tas upp med sterila handskar och slås upp, ett i taget, i en steril bägare. Kontrollera att inget är skämt. Äggen vispas ihop med en steril visp. 1340 mL ägglösning hälls ned i en steril 5 L E-kolv och skakas i skakmaskin 10 minuter.
- 2. En sats saltlösning och 26 mL malakitgröntlösning tillsätts.
- 3. Skakas i skakmaskin 10 minuter. Blandningen filtreras genom gasväv (steril) och får vila i 20-30 minuter.
- 4. Dispenseras i sterila odlingsrör.
- 5. Mediet koaguleras i värmeskåp 80-85 ºC 1 timme.
- Lutlösning:
- Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsätt
- ≈ 100 mL lutpastiller NaOH, som får lösa sig till följande dag.
- Till 2 hinkar med 8-10 L vatten tillsätt
OBS! Glasögon och handskar måste användas vid hanteringen av lutlösningen.
- Saltlösning
- Kalium-di-vätefosfat KH2PO4 ---- 3,2 g
- Magnesiumfosfat MgSO4x7H2O ---- 0,32 g
- Tri-Magnesium-dicitrat C12H10Mg3O14x14 H2O ---- 0,8 g
- L-Aspargin ---- 4,8 g
- Glycerol ---- 16,0 mL
- 1 M HCl ---- 50,0 mL
- Avjoniserat vatten ---- 700,0 mL
- 1. Saltlösningen vägs upp i 1500 mL E-kolv.
- 2. Värms till nästan kokpunkt.
- 3. 40 g potatisstärkelse löses i 100 mL avjoniserat vatten.
- 4. Stärkelselösningen tillsätts under omskakning.
- 5. Autoklaveras i 20 minuter, 120 ºC.
- 6. Efter autoklavering förvaras kolvarna i rumstemperatur.
- Malakitgrönt 2 % lösning
- Malakitgrönt-oxalat ---- 3,0 g
- Avjoniserat vatten ---- 150 mL
- 1. Malakitgrönt-oxalat vägs upp i 300 mL glasflaska.
- 2. Avjoniserat vatten tillsätts.
- 3. Flaskan placeras i vattenbad med kokande vatten.
- 4. Flaskan skakas då och då tills pulvret gått i lösning.
Reagens för dekontaminering av prov[redigera]
- NALC och NaOH
- A. 4% NaOH ----- 500 mL
- B. 2.9 % natriumcitrat dihydrat eller 2.6 % vattenfri natriumcitrat ----- 500 mL
- C. NALC (tillverka dagligen) ----- 5 g
- D. pH 6,8 fosfatbuffert (eller sterilt destillerat vatten)
Blanda A och B, sterilisera och förvara för användning senare. Tillsätt reagens C strax innan användning. Förbrukas inom 24 timmar.
- Natriumlaurylsulfatlösning
- Natrium laurylsulfat 99,9 % ---- 45 g
- Avjoniserat vatten ---- 1500 mL
- Natriumhydroxid, NaOH ---- 15 g
Laurylsulfatet löses i ca 60 ºC vatten, NaOH tillsätts innan utfällningen börjar. Använd mycket rena kärl. Fylls med ca 750 mL på 1 liters flaskor och autoklaveras i 120 ºC i 20 min. Ställs i 37 ºC termostat snarast.
- Neutralisationslösning för dekontaminering
- Svavelsyra H2SO4 konc. (98 %)---- 0,9 mL
- Avjoniserat vatten ---- 1000 mL
- Bromkresolpurpur 1 % ---- 0,8 mL
Blandas, fylles med ca 1000 mL på 1 liters flaskor. Autoklaveras 120 ºC i 20 minuter.
Reagens för fluorescensmikroskopi[redigera]
- Auramin
- Auramin ---- 3,0 g
- Fenol ---- 32 mL
- H2O ---- 968 mL
- Syra-alkohol lösning.
- 3,0 mL koncentrerad HCl adderas långsamt till 97,0 mL 90-95 % etanol (stark värme kan utvecklas).
Reagens för Hallbergfärgning[redigera]
- Stamlösningar
- Nachtblaulösning
- Nachtblau ---- 5 g
- 95 % alkohol ---- 100 mL
- K2SO4-lösning K2SO4 ---- 4 g
- Aq dest ---- 100 g
- Brukslösningar
- Nachtblaulösning, bruks
- Aq dest ---- 405 mL
- K2SO4 -lösning ---- 4,5 mL
- Nachtblaulösning ---- 45 mL
Nachtblaulösning måste efter hopblandningen upphettas till 75 º-80 ºC innan den används.
- Fuchsinlösning
- Fuchsin ---- 1 g
- (för kontrastfärgning) 70 % alkohol ---- 1000 mL
- PANTA
- Polymyxin B ---- 50 enheter/mL
- Amfotericin ---- 5 mg/L
- Nalixidinsyra ---- 20 mg/L
- Trimetoprim ---- 5 mg/L
- Azlocillin ---- 10 mg/L
Färdig lösning kan köpas från Becton Dickinson.