Bilaga 1 (CNS)

Från Referensmetodik för laboratoriediagnostik
(Omdirigerad från Gramfärgning)
Hoppa till navigering Hoppa till sök
Den utskrivbara versionen stöds inte längre och kanske innehåller renderingsfel. Uppdatera din webbläsares bokmärken och använd standardutskriftsfunktionen istället.

Till innehållsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet


Bilaga 1

Detektion av bakterier i direktutstryk: Gramfärgning

Reagens

Initialfärgning

  • Kristallviolett, stamlösning
    • Kristallviolett 100 g
    • (Merck art nr 15940)
    • Etanol 96 % 750 mL

VARNING! Etanol är brandfarligt.

  • Ammoniumoxalatlösning 1 %
    • Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi)
  • Kristallviolett brukslösning
    • Kristallviolett stamlösning 100 mL
    • Ammoniumoxalatlösning 1 % 500 mL
    • Renat vatten, ex dest. eller FRO 400 mL
    • (FRO=Filtered Reversed Osmosis)

Anvisning:

Brukslösningen filtreras genom filtrerpapper innan den används.

Förvaring: Rumstempertaur


Fixering av utstryk

  • Lugol, brukslösning
    • Jodkristaller puriss 1 g
    • Kaliumjodid (pro analysi) 2 g
    • Renat vatten, ex dest. eller FRO 300 mL

Anvisning:

Lös jodkristallerna med kaliumjodiden i vatten.

Autoklaveras ej.

Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur

Avfärgning

  • Acetonsprit
    • Aceton (puriss) (KEBO art nr 2. 1015-1) 20 mL
    • Etanol (96 %) 80 mL

Förvaring: Rumstemperatur

Som alternativ kan ren etanol (96 %) användas.

VARNING! Mycket brandfarligt.

Kontrastfärg

  • Karbolfuchsin stamlösning
    • Basiskt fuchsin 8g
    • Etanol 90% 92 g
    • Fenol 90% 50 g
    • Renat vatten ad l000g

Hållbarhet: 3 år

Karbolfuchsin, bruksiösning: 10 mL stamlösning blandas med 90 mL renat vatten.

Förvaring: Rumstemperatur

Fixering av utstryk

  • Lufttorka utstryket på en plan yta.
  • Fixera över låga.
  • Placera alternativt några droppar metanol på objektglaset. Låt ligga 2 min. Låt kvarvarande metanol rinna av utan att skölja och låt utstryket lufttorka igen.

Färgningsprocedur

  • Flöda det fixerade preparatet med kristallviolettlösning. Låt färgen ligga kvar i 30 sek. Häll av kristallviolettlösningen. Skölj bort resterande lösning med Lugols lösning och flöda sedan med mer Lugols lösning. Låt lösningen ligga kvar i 60 sek.
  • Avfärga genom att låta acetonspriten flöda över utstryket medan objektglaset hålls i lutande vinkel. Sluta när ingen mer färg lossnar. Anpassa avfärgningen till tjockleken på utstryket. Skölj försiktigt bort överflöd av spritenlacetonspriten med kranvatten.
  • Kontrastfärga genom att hälla på karbolfuchsin 15 sek. Skölj försiktigt bort kontrastfärgen med kranvatten. Torka objektglaset i stående position eller använd en kommersiell objektglastorkare.