Skillnad mellan versioner av "PAR 04 Mikrosporidier"
(Skapade sidan med ' Mikroskopisk påvisning av microsporidia-sporer efter förstärkt trikromfärgning Analysprincip Mikroskopisk påvisning av microsporidia-sporer. Lufttorkade preparat fixeras me...') |
|||
| (20 mellanliggande sidversioner av samma användare visas inte) | |||
| Rad 1: | Rad 1: | ||
| + | '''Huvudartikel''', reviderad i mars 2012. | ||
| − | Mikroskopisk påvisning av microsporidia-sporer efter förstärkt trikromfärgning | + | ----- |
| − | Analysprincip | + | ''Till innehållsförteckningen för [[Referensmetodik:Parasitologisk diagnostik]] och [[Referensmetodik: Tarminfektioner, 2:a upplagan 2002|Tarminfektioner]]'' |
| + | ---- | ||
| + | ==Mikroskopisk påvisning av microsporidia-sporer efter förstärkt trikromfärgning== | ||
| + | ===Analysprincip=== | ||
Mikroskopisk påvisning av microsporidia-sporer. Lufttorkade preparat fixeras med metanol, infärgas med modifierad trikromfärg, avfärgas och dehydreras. Avläsning sker i ljusmikroskop. Sporerna färgas rosa mot en blå bakgrund. | Mikroskopisk påvisning av microsporidia-sporer. Lufttorkade preparat fixeras med metanol, infärgas med modifierad trikromfärg, avfärgas och dehydreras. Avläsning sker i ljusmikroskop. Sporerna färgas rosa mot en blå bakgrund. | ||
| − | Speciell utrustning | + | ===Speciell utrustning=== |
| − | + | Ljusmikroskop med kalibrerat mätokular | |
immersionsobjektiv 100 x | immersionsobjektiv 100 x | ||
| − | Reagenser | + | ===Reagenser=== |
| − | formaldehydlösning 3,7 % (=10 % formalin) | + | *formaldehydlösning 3,7 % (=10 % formalin) |
| − | metanol 99 % | + | *metanol 99 % |
| − | förstärkt trikromfärg (Ryan-Blue) | + | *förstärkt trikromfärg (Ryan-Blue) |
| − | Alternativ 1 | + | :'''''Alternativ 1''''': färdig lösning, Trichrome Blue, från Meridian (ref. 1) |
| − | Alternativ 2 | + | :'''''Alternativ 2''''': för egen beredning av reagens se referens 2, 3 eller 4. |
| − | ättiksyra i etanol 90 % | + | |
| − | ättiksyra (isättika) 100 % 4,5 mL | + | *ättiksyra i etanol 90 % |
| − | etanol 90% 995,5 mL | + | :ättiksyra (isättika) 100 % 4,5 mL |
| − | etanol 95 %, | + | :etanol 90% 995,5 mL |
| − | etanol 99,5 % | + | *etanol 95 %, |
| − | xylol alternativt xylol-substitut | + | *etanol 99,5 % |
| − | kompatibelt monteringsmedium | + | *xylol alternativt xylol-substitut |
| − | immersionsolja | + | *kompatibelt monteringsmedium |
| − | Analysprocedur | + | *immersionsolja |
| − | Förbehandling av provmaterial | + | |
| + | ===Analysprocedur=== | ||
| + | ====Förbehandling av provmaterial==== | ||
Feces: okoncentrerad feces fixerad i formaldehyd eller SAF. | Feces: okoncentrerad feces fixerad i formaldehyd eller SAF. | ||
Lämplig spädning: 1 del feces till 3 delar fixativ. Mycket tunn fecesblandning centrifugeras och sedimentet används för utstryk. | Lämplig spädning: 1 del feces till 3 delar fixativ. Mycket tunn fecesblandning centrifugeras och sedimentet används för utstryk. | ||
Färgningen kan också utföras på ofixerad feces spädd med 0,9 % NaCl eller annat provmaterial: sputum, BAL, urinsediment, ögonskrap etc. | Färgningen kan också utföras på ofixerad feces spädd med 0,9 % NaCl eller annat provmaterial: sputum, BAL, urinsediment, ögonskrap etc. | ||
| − | Färgningsprocedur | + | ====Färgningsprocedur==== |
Observera att varje färgningsomgång skall innehålla en positiv kontroll. Se under kvalitetssäkring. | Observera att varje färgningsomgång skall innehålla en positiv kontroll. Se under kvalitetssäkring. | ||
| − | 1. Märk önskat antal objektglas. | + | |
| + | 1. Märk önskat antal objektglas. | ||
| + | |||
2. Stryk med pipettspetsen ut ca 10 µL av provmaterialet. Gör mycket tunna utstryk. | 2. Stryk med pipettspetsen ut ca 10 µL av provmaterialet. Gör mycket tunna utstryk. | ||
| + | |||
3. Låt preparatet lufttorka. | 3. Låt preparatet lufttorka. | ||
| + | |||
4. Fixera glaset 5 min i metanol. | 4. Fixera glaset 5 min i metanol. | ||
| + | |||
5. Placera glaset i trikromfärg. Låt stå 90 min i rumstemperatur. | 5. Placera glaset i trikromfärg. Låt stå 90 min i rumstemperatur. | ||
| + | |||
6. Torka av färgöverskottet på glasets baksida mot en allduk. Tryck försiktigt glasets framsida mot allduken. | 6. Torka av färgöverskottet på glasets baksida mot en allduk. Tryck försiktigt glasets framsida mot allduken. | ||
| + | |||
7. Avfärga i avfärgningslösning (ättikssyra i 90 % etanol) ungefär 5 sek. Låt överskott av vätska rinna av mot allduk mellan varje kyvett. | 7. Avfärga i avfärgningslösning (ättikssyra i 90 % etanol) ungefär 5 sek. Låt överskott av vätska rinna av mot allduk mellan varje kyvett. | ||
| + | |||
8. Skölj hastigt i 95 % etanol. | 8. Skölj hastigt i 95 % etanol. | ||
| + | |||
9. Låt stå i 95 % etanol 5 min. | 9. Låt stå i 95 % etanol 5 min. | ||
| + | |||
10. Låt stå i 99,5 % etanol 10 min. | 10. Låt stå i 99,5 % etanol 10 min. | ||
| + | |||
11. Låt stå i xylol alternativt xylolsubstitut 10 min. | 11. Låt stå i xylol alternativt xylolsubstitut 10 min. | ||
| + | |||
12. Montera glaset med kompatibelt monteringsmedium och täckglas. Låt torka. Förvara glasen skyddade mot ljus. | 12. Montera glaset med kompatibelt monteringsmedium och täckglas. Låt torka. Förvara glasen skyddade mot ljus. | ||
| − | Granskning av preparat | + | |
| − | Granska 200 synfält med 100 x immersionsobjektiv. För morfologiska kriterier hänvisas till avsnittet om | + | ====Granskning av preparat==== |
| − | Kvalitetssäkring | + | Granska 200 synfält med 100 x immersionsobjektiv. För morfologiska kriterier hänvisas till avsnittet om [[microsporidia]]. |
| − | Intern | + | |
| − | Positiv kontroll som innehåller formalin eller SAF-fixerade microsporidiasporer. Förvaras i kylskåp och behandlas som övriga prov. | + | ====Kvalitetssäkring==== |
| − | Intern panel innehållande färgade preparat med mikrosporidia-sporer | + | '''Intern''': |
| − | Lämpligt bildmaterial finns under referens 4 och 5. | + | :Positiv kontroll som innehåller formalin eller SAF-fixerade microsporidiasporer. Förvaras i kylskåp och behandlas som övriga prov. |
| − | Extern | + | :Intern panel innehållande färgade preparat med mikrosporidia-sporer. |
| − | + | :Lämpligt bildmaterial finns under referens 4 och 5. | |
| − | Svarsrutiner | + | '''Extern''': ingår mycket sporadiskt i UK-NEQAS feces-utskick |
| + | |||
| + | ====Svarsrutiner==== | ||
Negativt prov: Inga sporer påvisade | Negativt prov: Inga sporer påvisade | ||
| + | |||
Positivt prov: Sporer av Microsporidia påvisade | Positivt prov: Sporer av Microsporidia påvisade | ||
| − | REFERENSER | + | ==REFERENSER== |
1. Meridian Diagnostics, Inc. Para-PacTrichrome Blue. Produktinformation | 1. Meridian Diagnostics, Inc. Para-PacTrichrome Blue. Produktinformation | ||
| − | + | ||
2. Ryan NJ, Sutherland G, Coughlan K, Globan M, Doultree, Marshall J, Baird, Pedersen J, Dwyer B. A new trichrome-blue stain for detection of microsporidial species in urine, stool, and nasopharyngeal specimens. 1993;31:3264-3269. | 2. Ryan NJ, Sutherland G, Coughlan K, Globan M, Doultree, Marshall J, Baird, Pedersen J, Dwyer B. A new trichrome-blue stain for detection of microsporidial species in urine, stool, and nasopharyngeal specimens. 1993;31:3264-3269. | ||
| + | |||
3. Garcia L. Diagnostic Medical Parasitology. ASM Press, Washington | 3. Garcia L. Diagnostic Medical Parasitology. ASM Press, Washington | ||
| + | |||
4. Ash L, Orihel C. Atlas of Human Parasitology. ASCP Press, Chicago | 4. Ash L, Orihel C. Atlas of Human Parasitology. ASCP Press, Chicago | ||
| + | |||
5. Rondamelli EG, Scaglia M. Atlas of human protozoa. Masson 1993. | 5. Rondamelli EG, Scaglia M. Atlas of human protozoa. Masson 1993. | ||
| + | |||
| + | |||
| + | [[Kategori:Parasiter]] | ||
| + | [[Kategori:Laboratoriediagnostik]] | ||
| + | [[Kategori:Laboratoriediagnostik-parasiter]] | ||
| + | ---------- | ||
Nuvarande version från 6 december 2012 kl. 14.54
Huvudartikel, reviderad i mars 2012.
Till innehållsförteckningen för Referensmetodik:Parasitologisk diagnostik och Tarminfektioner
Mikroskopisk påvisning av microsporidia-sporer efter förstärkt trikromfärgning[redigera]
Analysprincip[redigera]
Mikroskopisk påvisning av microsporidia-sporer. Lufttorkade preparat fixeras med metanol, infärgas med modifierad trikromfärg, avfärgas och dehydreras. Avläsning sker i ljusmikroskop. Sporerna färgas rosa mot en blå bakgrund.
Speciell utrustning[redigera]
Ljusmikroskop med kalibrerat mätokular immersionsobjektiv 100 x
Reagenser[redigera]
- formaldehydlösning 3,7 % (=10 % formalin)
- metanol 99 %
- förstärkt trikromfärg (Ryan-Blue)
- Alternativ 1: färdig lösning, Trichrome Blue, från Meridian (ref. 1)
- Alternativ 2: för egen beredning av reagens se referens 2, 3 eller 4.
- ättiksyra i etanol 90 %
- ättiksyra (isättika) 100 % 4,5 mL
- etanol 90% 995,5 mL
- etanol 95 %,
- etanol 99,5 %
- xylol alternativt xylol-substitut
- kompatibelt monteringsmedium
- immersionsolja
Analysprocedur[redigera]
Förbehandling av provmaterial[redigera]
Feces: okoncentrerad feces fixerad i formaldehyd eller SAF. Lämplig spädning: 1 del feces till 3 delar fixativ. Mycket tunn fecesblandning centrifugeras och sedimentet används för utstryk. Färgningen kan också utföras på ofixerad feces spädd med 0,9 % NaCl eller annat provmaterial: sputum, BAL, urinsediment, ögonskrap etc.
Färgningsprocedur[redigera]
Observera att varje färgningsomgång skall innehålla en positiv kontroll. Se under kvalitetssäkring.
1. Märk önskat antal objektglas.
2. Stryk med pipettspetsen ut ca 10 µL av provmaterialet. Gör mycket tunna utstryk.
3. Låt preparatet lufttorka.
4. Fixera glaset 5 min i metanol.
5. Placera glaset i trikromfärg. Låt stå 90 min i rumstemperatur.
6. Torka av färgöverskottet på glasets baksida mot en allduk. Tryck försiktigt glasets framsida mot allduken.
7. Avfärga i avfärgningslösning (ättikssyra i 90 % etanol) ungefär 5 sek. Låt överskott av vätska rinna av mot allduk mellan varje kyvett.
8. Skölj hastigt i 95 % etanol.
9. Låt stå i 95 % etanol 5 min.
10. Låt stå i 99,5 % etanol 10 min.
11. Låt stå i xylol alternativt xylolsubstitut 10 min.
12. Montera glaset med kompatibelt monteringsmedium och täckglas. Låt torka. Förvara glasen skyddade mot ljus.
Granskning av preparat[redigera]
Granska 200 synfält med 100 x immersionsobjektiv. För morfologiska kriterier hänvisas till avsnittet om microsporidia.
Kvalitetssäkring[redigera]
Intern:
- Positiv kontroll som innehåller formalin eller SAF-fixerade microsporidiasporer. Förvaras i kylskåp och behandlas som övriga prov.
- Intern panel innehållande färgade preparat med mikrosporidia-sporer.
- Lämpligt bildmaterial finns under referens 4 och 5.
Extern: ingår mycket sporadiskt i UK-NEQAS feces-utskick
Svarsrutiner[redigera]
Negativt prov: Inga sporer påvisade
Positivt prov: Sporer av Microsporidia påvisade
REFERENSER[redigera]
1. Meridian Diagnostics, Inc. Para-PacTrichrome Blue. Produktinformation
2. Ryan NJ, Sutherland G, Coughlan K, Globan M, Doultree, Marshall J, Baird, Pedersen J, Dwyer B. A new trichrome-blue stain for detection of microsporidial species in urine, stool, and nasopharyngeal specimens. 1993;31:3264-3269.
3. Garcia L. Diagnostic Medical Parasitology. ASM Press, Washington
4. Ash L, Orihel C. Atlas of Human Parasitology. ASCP Press, Chicago
5. Rondamelli EG, Scaglia M. Atlas of human protozoa. Masson 1993.