Bilaga 6 (CNS)

Hoppa till: navigering, sök

Till innehÄllsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet


Bilaga 6

TBE: BestÀmning av IgM-antikroppar med ELISA

Aktuell infektion hos icke-TBE-vaccinerad individ diagnostiseras serologiskt genom pĂ„visning av IgM anti-TBE-aktivitet i serum med ÎŒ-capture ELISA. Antihumant IgM bundet till fast fas fĂ„ngar IgM-antikroppsaktivitet i patientserum. TBE-specifik IgM-aktivitet indikeras med peroxidasmĂ€rkt renat TBE-virus antigen, följt av substratsteg.


Metod för detektion av IgM mot TBE-virus

ÎŒ-capture ELISA: Get-antihumant IgM (Cappel) spĂ€tt i coatingbuffert (0,05 mol/L karbonatbuffert pH 9,6) fĂ„r binda till 96-hĂ„lsplattor av polystyren (Maxisorp, Nunc A, över natt i rumstemperatur. DĂ€refter kan plattorna förvaras i +4 °C tills de anvĂ€nds. Plattorna tvĂ€ttas med tvĂ€ttbuffert (0,9 % NaCl med 0,05 % tween) och eftercoatas med 5 % BSA i coatingbuffert i +37 °C 2 tim: Eftercoatade plattor kan förvaras i +4 °C i upp till 4 dagar.

Serumprov, samt positivt och negativt kontrollserum, spĂ€des 1:200, 1:2000 och 1:20000 i ELISA-buffert (EB; PBS med 0,5% BSA och 0,05% tween). Den eftercoatade plattan tvĂ€ttas med tvĂ€ttbuffert och serumspĂ€dningarna sĂ€tts plattans brunnar, en brunn/spĂ€dning. Plattan inkuberas 1 tim +37 °C och tvĂ€ttas. PeroxidasrnĂ€rkt TBE-antigen (FolkhĂ€lsomyndigheten) i uttitrerad spĂ€dning i EB sĂ€tts till alla brunnar med serumspĂ€dning, plattan inkuberas 2 tim +37 °C. Efter tvĂ€tt tillsĂ€tts substrat (1 mg/mL orthophenylendiamin i fosfat-citratbuffert pH 5,0 med 0,001 % H2O reaktionen stoppas efter 15 minuter med 2,5 mol/L H2S04 och absorbansen (OD) avlĂ€ses vid 490 nm. Cut-off för positivt test Ă€r faststĂ€llt till OD 0,3.