Bilaga 1 (CNS)
(Omdirigerad frÄn GramfÀrgning)
Till innehÄllsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet
Bilaga 1
Detektion av bakterier i direktutstryk: GramfÀrgning
Reagens
InitialfÀrgning
- Kristallviolett, stamlösning
- Kristallviolett 100 g
- (Merck art nr 15940)
- Etanol 96 % 750 mL
VARNING! Etanol Àr brandfarligt.
- Ammoniumoxalatlösning 1 %
- Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi)
- Kristallviolett brukslösning
- Kristallviolett stamlösning 100 mL
- Ammoniumoxalatlösning 1 % 500 mL
- Renat vatten, ex dest. eller FRO 400 mL
- (FRO=Filtered Reversed Osmosis)
Anvisning:
Brukslösningen filtreras genom filtrerpapper innan den anvÀnds.
Förvaring: Rumstempertaur
Fixering av utstryk
- Lugol, brukslösning
- Jodkristaller puriss 1 g
- Kaliumjodid (pro analysi) 2 g
- Renat vatten, ex dest. eller FRO 300 mL
Anvisning:
Lös jodkristallerna med kaliumjodiden i vatten.
Autoklaveras ej.
Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur
AvfÀrgning
- Acetonsprit
- Aceton (puriss) (KEBO art nr 2. 1015-1) 20 mL
- Etanol (96 %) 80 mL
Förvaring: Rumstemperatur
Som alternativ kan ren etanol (96 %) anvÀndas.
VARNING! Mycket brandfarligt.
KontrastfÀrg
- Karbolfuchsin stamlösning
- Basiskt fuchsin 8g
- Etanol 90% 92 g
- Fenol 90% 50 g
- Renat vatten ad l000g
HÄllbarhet: 3 Är
Karbolfuchsin, bruksiösning: 10 mL stamlösning blandas med 90 mL renat vatten.
Förvaring: Rumstemperatur
Fixering av utstryk
- Lufttorka utstryket pÄ en plan yta.
- Fixera över lÄga.
- Placera alternativt nÄgra droppar metanol pÄ objektglaset. LÄt ligga 2 min. LÄt kvarvarande metanol rinna av utan att skölja och lÄt utstryket lufttorka igen.
FĂ€rgningsprocedur
- Flöda det fixerade preparatet med kristallviolettlösning. LÄt fÀrgen ligga kvar i 30 sek. HÀll av kristallviolettlösningen. Skölj bort resterande lösning med Lugols lösning och flöda sedan med mer Lugols lösning. LÄt lösningen ligga kvar i 60 sek.
- AvfÀrga genom att lÄta acetonspriten flöda över utstryket medan objektglaset hÄlls i lutande vinkel. Sluta nÀr ingen mer fÀrg lossnar. Anpassa avfÀrgningen till tjockleken pÄ utstryket. Skölj försiktigt bort överflöd av spritenlacetonspriten med kranvatten.
- KontrastfÀrga genom att hÀlla pÄ karbolfuchsin 15 sek. Skölj försiktigt bort kontrastfÀrgen med kranvatten. Torka objektglaset i stÄende position eller anvÀnd en kommersiell objektglastorkare.