ProvsÀttning
Till innehÄllsförteckngen för Referensmetodik: Bakteriologisk diagnostik av infektioner i hud, mjukdelar, skelett och inre organ
InnehÄll
Ankomstkontroll pÄ laboratoriet
- Kontrollera;
- att provkÀrlens/objektglasens mÀrkning och antal överensstÀmmer med remiss.
- att bestÀllare finns angivet.
- att rekommenderat provmaterial tagits till undersökningen.
- att rekommenderad transporttid ej överskridits.
Avvikelser frÄn ovanstÄende bör föranleda diskussion med bestÀllaren. Om behandlande lÀkare anser nytt prov inte kan tas och att analysen ska utföras och rapporteras trots felaktigheter pÄ det inkommande provet, ska felkÀllorna kommenteras i laboratorierapporten.
ProvsÀttning
AllmÀn odling, referensmetodik
1. Aerob odling
Alla typer av prov, definierade i tabell 6, odlas primÀrt pÄ blodagar, hematinagar och CLED-agar. I förekommande fall sÀtts prov ocksÄ till anrikningsbuljong, FAB. Prov som anlÀnder till laboratoriet i blododlingsflaskor, inkuberas upp till 10 dygn och sekundÀrsprids nÀrhelst indikation till vÀxt föreligger. SÄdana prov som utgörs av fast vÀvnad etc., vilka överförs till anrikningsbuljong, sekundÀrsprids pÄ agarplattor av samma sort. Buljongen inkuberas totalt 10 dygn.
2. Anaerob odling, rutinnivÄ
Metoden avser miniminivÄ för anaerob odling som i förekommande fall kompletterar aerob odling, se ocksÄ tabell 6, fotnot 4. Prov inokuleras pÄ anaeroba blodplattor, FAA (se nedan), som görs semiselektiva genom applikation av aminoglykosid- och metronidazollappar i primÀrstryket (se tabell 6, fotnot 5). Inokulera Àven anaerob buljong (FAB) som inkuberas aerobt eller anaerobt.
De anaeroba blodplattorna bör vara prereducerade eller fÀrska. Inokulering sker i anaerobbox (referensmetod), men aerob provsÀttning med sekundÀr inkubering i klocka med gasgenererande kuvert som t.ex. Anaerogen (OXOID) eller i klocka med evakueringssystem Àr accepterad alternativ metodik. Med kuvert erhÄlls god anaerobios tillrÀcklig för flertalet kliniskt relevanta anaeroba bakterier. Med resazurin som indikator garanteras redoxförhÄllanden †110 mV. AvlÀs dag 2 eller efter medicinsk bedömning. Observera att anaerobt inkuberade plattor inte bör exponeras för luft under de första 48 timmarna. Vissa lÄngsamvÀxande arter, hit hör peptostreptokocker och svartpigmenterade gramnegativa stavar som Porphyromonas, Prevotella, och Bilophila kan behöva inkuberas ytterligare en eller flera dagar för detekterbara kolonier. Andra anaeroba bakterier, t.ex. Actinomyces kan behöva 7-10 dagars inkubationstid. FAB granskas för vÀxt dagligen upp till 10 dygn.
Den förenklade anaeroba odlingen Àr med beskrivna förbehÄll fullt acceptabel i rutindiagnostiken. Det enskilda laboratoriet definierar utifrÄn denna miniminivÄ eventuell modifiering av anaerobdiagnostiken, innefattande förlÀngd inkuberingstid, bruk av selektiva medier (se nedan), sÀrskilt i de fall anaerob odling speciellt begÀrts.
3. Anaerob odling, jÀmförelsenivÄ
Metoden bör anvÀndas vid studier men kan Àven anvÀndas i rutinen efter sÀrskild medicinsk bedömning. Prov inokuleras pÄ prereducerade eller fÀrska anaeroba blodagarplattor, d.v.s. FAA, samt tvÄ typer av selektiva FAA; kana-vanko-agar och neomycinagar (enligt bilaga 1). Inokulera Àven anaerob buljong (FAB) i förekommande fall och inkubera denna anaerobt. För anaerob miljö anvÀnds anaerobbox i vilken all hantering av provet sker (miljö 10 % H2, 5-10% CO2, 80-85 % N2. Alternativ Àr inkubering i nÄgon typ av klocka (se under punkt 2).
Inkubera anaeroba plattor och eventuell buljong 10 dygn. Daglig avlÀsning.
Speciell odling, referensmetodik
Tabell 6
Tabell 7.
Val av medier, atmosfÀr, temperatur och inkubationstid beskrivs i tabell 7.
Inokulering av medier
AllmÀnt
Inokulera alltid medier i en bestÀmd ordning med det minst selektiva mediet först. Provmaterialet kan kastas en vecka efter att provet primÀrodlats, eller efter medicinsk bedömning. LÀmpliga metoder för provapplikation pÄ agarplattor beskrivs i figur 7 och 8. MÀrk först agarplattorna med Labnr och inokuleringsdatum. PrimÀrstryk i förekommande fall med provtagningspinne (fig 7) eller applicera ca 100 mikroL material pÄ plattan (fig 8).
Gör först ett rakt primÀrstryk. Stryk sedan vinkelrÀtt mot detta första stryk. Rotera pinnen under hela stryket. à terstÀll provtagningspinnen i transportröret. SekundÀrstryk med plastinös enligt 2 och 3.
PrimÀrstryk agarplattorna med plastinös enligt 1. Stryk först ett rakt stryk. Stryk sedan vinkelrÀtt mot detta första stryk. SekundÀrstryk med plastinös enligt 2 och 3.
Inokulering av flytande medier
MÀrk buljongrör med Labnr och inokuleringsdatum.
Ta provmaterial med engÄngs plastpipett/sterila instrument och inokulera mediet.
Direktmikroskopi
MĂ€rk objektglas med Labnr.
Ta provmaterial med engÄngs plastpipett/sterila instrument och stryk pÄ objektglaset.
Provmaterialrelaterad beskrivning
AllmÀn odling
Sekret pinnprov i transportrör
- Ăppna transportröret och ta ut provtagningspinnen.
- Inokulera och inkubera medier.
Sekret i anaerob transportflaska eller sterilt rör/kÀrl
- Homogenisera innehÄllet genom att vortexa eller vÀnda det förslutna röret nÄgra gÄnger.
- Ăppna röret och ta material med engĂ„ngs plastpipett. Förslut röret.
- Inokulera och inkubera medier. Gör anaerob odling först.
VÀvnad i sterilt rör/kÀrl
- Ăppna röret och ta material.
- Placera materialet i steril mortel.
- Homogenisera materialet i steril mortel. TillsÀtt lite FA-buljong om provet Àr torrt.
- Inokulera och inkubera medier. Gör anaerob odling först.
VÀvnad i FA-buljong med tecken pÄ vÀxt vid ankomst
- Vortexa eller vÀnd det förslutna röret nÄgra gÄnger.
- Ăppna röret och ta material med engĂ„ngs plastpipett. Förslut röret.
- Inokulera och inkubera medier. Gör anaerob odling först.
VÀvnad i FA-buljong utan tecken pÄ vÀxt vid ankomst
- Inkubera röret.
- Inokulera och inkubera medier vid tecken pÄ vÀxt. Vid tveksamhet om vÀxt Àr det lÀmpligt att gramfÀrga buljongen samt subkultivera till agarplattor.
Ej kroppseget material i FA-buljong
- Inkubera i 10 dygn i 35 °C - 37 °C.
- Inokulera och inkubera medier vid tecken pÄ vÀxt. Vid tveksamhet om vÀxt Àr det lÀmpligt att gramfÀrga buljongen samt subkultivera till agarplattor.
Ej kroppseget material i sterilt rör/kÀrl med förvÀntad monomikrobiell floratyp
- Ăppna röret och placera materialet i FA-buljong.
- Inkubera i 10 dygn i 35 °C - 37 °C.
- Vid vÀxt ta material frÄn buljongröret. Inokulera och inkubera medier.
Ej kroppseget material i sterilt rör/kÀrl med förvÀntad polymikrobiell floratyp (spiral, drÀnage)
- Placera under anaeroba och sterila betingelser.
- spiralen i steril petriskÄl och tillsÀtt FA-buljong. Skaka försiktigt.
- alternativt i FA-buljongrör och vortexa.
- Inokulera medier med hjÀlp av plastpasteurpipett. Gör anaerob odling först.
Blododlingsflaskor med tecken pÄ vÀxt vid ankomst
- Odla ut vid ankomsten.
- Inokulera och inkubera medier.
- TillsÀtt nÀringssubstrat enligt tillverkarens anvisningar.
- Inkubera flaskorna ett dygn i 36 °C innan eventuell ny utodling (eller tills blododlingssystemet signalerar).
- Om det vÀxer rikligt pÄ direktutodlade medier behöver provet inte odlas ut igen.
Blododlingsflaskor utan tecken pÄ vÀxt vid ankomst
- TillsÀtt nÀringssubstrat enligt tillverkarens anvisningar.
Inkubera flaskorna i 36 °C och avlÀs i fem dygn (eller tills blododlingssystemet signalerar) innan eventuell utodling. Inokulera och inkubera medier.
CAPD (PD), dialysvÀtska
- Desinficera dialyspÄsen.
- Aspirera 100 mL dialysvÀtska och sÀtt till 2st 50 mL centrifugrör.
- Centrifugera bÄda rören i 2000 x g, 10 min.
- Sug av ovanvÀtskan med steril engÄngspipett av plast. Kasta ovanvÀtskan. Om endast liten mÀngd sediment, lÀmna kvar totalt ca 2 mL i röret för utodling.
- Inokulera frÄn sedimentet: 0,1 mL/agarplatta samt 0,5 mL till anrikningsbuljong.
- LÀgg ev. material pÄ ett mÀrkt objektsglas för direktmikroskopi.
- Om blododlingsflaskor eventuellt anvÀnts, ÄtgÀrdas de enligt ovan.
Speciell odling
GBS-odling
- Inokulera provtagningspinnarna frĂ„n vagina respektive rektum tillsammans i anrikningsbuljong för grupp B streptokocker, âGBS-buljongâ.
- Inkubera buljongen i 1 dygn 35 o-37 °C.
- Inokulera en fÄrblodagarplatta med den inkuberade buljongen.
- Inkubera plattan i 35 °C -37 °C . AvlÀs efter 1 dygn. Om ingen vÀxt av GBS, reinkubera agarplattan 1 dygn .