Skillnad mellan versioner av "Bilaga 1 (CNS)"
Hoppa till navigering
Hoppa till sök
(Skapade sidan med '''Till innehållsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet'' ---- == Bilaga 1 == === Detektion av bakterier i direktutstryk: Gramfärgning =…') |
|||
| Rad 23: | Rad 23: | ||
**Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi) | **Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi) | ||
| − | Kristallviolett brukslösning | + | *''Kristallviolett brukslösning'' |
| − | Kristallviolett stamlösning 100 mL | + | **Kristallviolett stamlösning 100 mL |
| − | Ammoniumoxalatlösning 1% 500 mL | + | **Ammoniumoxalatlösning 1 % 500 mL |
| − | Renat vatten, ex dest. eller FRO 400 mL | + | **Renat vatten, ex dest. eller FRO 400 mL |
| − | (FRO=Filtered Reversed Osmosis) | + | **(FRO=Filtered Reversed Osmosis) |
Anvisning: | Anvisning: | ||
| + | |||
Brukslösningen filtreras genom filtrerpapper innan den används. | Brukslösningen filtreras genom filtrerpapper innan den används. | ||
| + | |||
Förvaring: Rumstempertaur | Förvaring: Rumstempertaur | ||
| − | Fixering av utstryk | + | |
| − | Lugol, | + | '''Fixering av utstryk''' |
| − | Jodkristaller puriss 1 g | + | *''Lugol, brukslösning'' |
| − | Kaliumjodid (pro analysi) 2 g | + | **Jodkristaller puriss 1 g |
| − | Renat vatten, ex dest. eller FRO 300 mL | + | **Kaliumjodid (pro analysi) 2 g |
| + | **Renat vatten, ex dest. eller FRO 300 mL | ||
Anvisning: | Anvisning: | ||
| + | |||
Lös jodkristallerna med kaliumjodiden i vatten. | Lös jodkristallerna med kaliumjodiden i vatten. | ||
| + | |||
Autoklaveras ej. | Autoklaveras ej. | ||
| − | Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur | + | |
| − | Avfärgning | + | Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur |
| − | Acetonsprit | + | |
| − | Aceton (puriss) (KEBO art nr 2. 1015-1) 20 mL | + | '''Avfärgning''' |
| − | Etanol (96%) | + | *''Acetonsprit'' |
| + | **Aceton (puriss) (KEBO art nr 2. 1015-1) 20 mL | ||
| + | **Etanol (96 %) 80 mL | ||
| + | |||
Förvaring: Rumstemperatur | Förvaring: Rumstemperatur | ||
| − | Som alternativ kan ren etanol (96%) användas. | + | |
| + | Som alternativ kan ren etanol (96 %) användas. | ||
| + | |||
VARNING! Mycket brandfarligt. | VARNING! Mycket brandfarligt. | ||
| − | Kontrastfärg | + | '''Kontrastfärg''' |
| − | Karbolfuchsin stamlösning | + | *''Karbolfuchsin stamlösning'' |
| − | Basiskt fuchsin 8g | + | **Basiskt fuchsin 8g |
| − | Etanol 90% 92 g | + | **Etanol 90% 92 g |
| − | Fenol 90% 50 g | + | **Fenol 90% 50 g |
| − | Renat vatten ad l000g | + | **Renat vatten ad l000g |
| + | |||
Hållbarhet: 3 år | Hållbarhet: 3 år | ||
| − | Karbolfuchsin, bruksiösning: 10 mL stamlösning blandas med | + | ''Karbolfuchsin, bruksiösning:'' 10 mL stamlösning blandas med |
90 mL renat vatten. | 90 mL renat vatten. | ||
| + | |||
Förvaring: Rumstemperatur | Förvaring: Rumstemperatur | ||
| − | Fixering av utstryk | + | '''Fixering av utstryk''' |
| + | |||
* Lufttorka utstryket på en plan yta. | * Lufttorka utstryket på en plan yta. | ||
* Fixera över låga. | * Fixera över låga. | ||
* Placera alternativt några droppar metanol på objektglaset. Låt ligga 2 min. Låt kvarvarande metanol rinna av utan att skölja och låt utstryket lufttorka igen. | * Placera alternativt några droppar metanol på objektglaset. Låt ligga 2 min. Låt kvarvarande metanol rinna av utan att skölja och låt utstryket lufttorka igen. | ||
| − | Färgningsprocedur | + | '''Färgningsprocedur''' |
* Flöda det fixerade preparatet med kristallviolettlösning. Låt färgen ligga kvar i 30 sek. Häll av kristallviolettlösningen. Skölj bort resterande lösning med Lugols lösning och flöda sedan med mer Lugols lösning. Låt lösningen ligga kvar i 60 sek. | * Flöda det fixerade preparatet med kristallviolettlösning. Låt färgen ligga kvar i 30 sek. Häll av kristallviolettlösningen. Skölj bort resterande lösning med Lugols lösning och flöda sedan med mer Lugols lösning. Låt lösningen ligga kvar i 60 sek. | ||
* Avfärga genom att låta acetonspriten flöda över utstryket medan objektglaset hålls i lutande vinkel. Sluta när ingen mer färg lossnar. Anpassa avfärgningen till tjockleken på utstryket. Skölj försiktigt bort överflöd av spritenlacetonspriten med kranvatten. | * Avfärga genom att låta acetonspriten flöda över utstryket medan objektglaset hålls i lutande vinkel. Sluta när ingen mer färg lossnar. Anpassa avfärgningen till tjockleken på utstryket. Skölj försiktigt bort överflöd av spritenlacetonspriten med kranvatten. | ||
Versionen från 1 november 2009 kl. 08.06
Till innehållsförteckningen för Referensmetodik: Infektioner i centrala nervsystemet
Bilaga 1
Detektion av bakterier i direktutstryk: Gramfärgning
Reagens
Initialfärgning
- Kristallviolett, stamlösning
- Kristallviolett 100 g
- (Merck art nr 15940)
- Etanol 96 % 750 mL
VARNING! Etanol är brandfarligt.
- Ammoniumoxalatlösning 1%
- Di-ammonium oxalat monohydrat (pro analysi)
- Kristallviolett brukslösning
- Kristallviolett stamlösning 100 mL
- Ammoniumoxalatlösning 1 % 500 mL
- Renat vatten, ex dest. eller FRO 400 mL
- (FRO=Filtered Reversed Osmosis)
Anvisning:
Brukslösningen filtreras genom filtrerpapper innan den används.
Förvaring: Rumstempertaur
Fixering av utstryk
- Lugol, brukslösning
- Jodkristaller puriss 1 g
- Kaliumjodid (pro analysi) 2 g
- Renat vatten, ex dest. eller FRO 300 mL
Anvisning:
Lös jodkristallerna med kaliumjodiden i vatten.
Autoklaveras ej.
Förvaring: Mörk flaska i rumstemperatur
Avfärgning
- Acetonsprit
- Aceton (puriss) (KEBO art nr 2. 1015-1) 20 mL
- Etanol (96 %) 80 mL
Förvaring: Rumstemperatur
Som alternativ kan ren etanol (96 %) användas.
VARNING! Mycket brandfarligt.
Kontrastfärg
- Karbolfuchsin stamlösning
- Basiskt fuchsin 8g
- Etanol 90% 92 g
- Fenol 90% 50 g
- Renat vatten ad l000g
Hållbarhet: 3 år
Karbolfuchsin, bruksiösning: 10 mL stamlösning blandas med 90 mL renat vatten.
Förvaring: Rumstemperatur
Fixering av utstryk
- Lufttorka utstryket på en plan yta.
- Fixera över låga.
- Placera alternativt några droppar metanol på objektglaset. Låt ligga 2 min. Låt kvarvarande metanol rinna av utan att skölja och låt utstryket lufttorka igen.
Färgningsprocedur
- Flöda det fixerade preparatet med kristallviolettlösning. Låt färgen ligga kvar i 30 sek. Häll av kristallviolettlösningen. Skölj bort resterande lösning med Lugols lösning och flöda sedan med mer Lugols lösning. Låt lösningen ligga kvar i 60 sek.
- Avfärga genom att låta acetonspriten flöda över utstryket medan objektglaset hålls i lutande vinkel. Sluta när ingen mer färg lossnar. Anpassa avfärgningen till tjockleken på utstryket. Skölj försiktigt bort överflöd av spritenlacetonspriten med kranvatten.
- Kontrastfärga genom att hälla på karbolfuchsin 15 sek. Skölj försiktigt bort kontrastfärgen med kranvatten. Torka objektglaset i stående position eller använd en kommersiell objektglastorkare.