Skillnad mellan versioner av "Bilaga 6. Parasitologiska metoder"

Från Referensmetodik för laboratoriediagnostik
Hoppa till navigering Hoppa till sök
 
Rad 24: Rad 24:
 
=== Mikroskopisk påvisning av microsporidiasporer efter förstärkt trikromfärgning ===
 
=== Mikroskopisk påvisning av microsporidiasporer efter förstärkt trikromfärgning ===
  
 +
Se länk [[PAR 04 Mikrosporidier|PAR 04]]
  
  
−
==== Analysprincip ====
 
  
−
Mikroskopisk påvisning av microsporidiasporer. Lufttorkade preparat fixeras med metanol, infärgas med modifierad trikromfärg, avfärgas och dehydreras. Avläsning sker i ljusmikroskop. Sporerna färgas rosa mot en blå bakgrund.
 
  
−
*Apparatur
 
−
**centrifug
 
−
**dragskåp
 
−
**automatpipett 10 - 50 µL
 
−
**ljusmikroskop med kalibrerat mätokular
 
−
**immersionsobjektiv 100x
 
  
−
*Material
 
−
**objektglas med mattfält
 
−
**pipettspetsar 10 - 50 µL
 
−
**glaskyvetter med lock
 
−
**täckglas No 0.
 
−
 
−
*Reagenser
 
−
** Formaldehydlösning 3,7 % (=10 % formalin. En del koncentrerad formaldehyd (37 - 40 %) späds med 9 delar destillerat vatten.
 
−
** Metanol 99 %
 
−
** Förstärkt trikromfärg (Trichrome Blue, Meridian 400501)
 
−
 
−
Ovanstående färgreagens består av följande ingredienser:
 
−
 
−
*Chromotrope 2R 60,0 g
 
−
*Aniline Blue 5,0 g
 
−
**Fosforwolframsyra 2,5 g
 
−
**Isättika 30 mL
 
−
**Destillerat vatten 1000 mL
 
−
 
−
 
−
**Ättiksyra i etanol 90 %
 
−
**Ättiksyra (isättika) 100 % 4,5 mL
 
−
**Etanol 90 % 995,5 mL
 
−
**Etanol 95%,
 
−
**Etanol 99, 5 %
 
−
** Histoclear
 
−
 
−
Apelsinolja, d-limonen, C10H16 70-100 % National Diagnostics HS-200
 
−
* DPX mounting medium BDH 36029 4H
 
−
* Immersionsolja
 
−
 
−
 
−
==== Analysprocedur ====
 
−
 
−
'''Förbehandling av provmaterial'''
 
−
 
−
'''Feces:''' okoncentrerad feces fixeras i formaldehyd eller SAF.
 
−
 
−
'''Lämplig spädning:''' 1 del feces till 3 delar fixativ. Mycket tunn fecesblandning centrifugeras och sedimentet används för utstryk. För att höja känsligheten färgas även ett koncentrerat fecesprov – späd sedimentet till lämplig tjocklek.
 
−
 
−
 
−
*Färgningsprocedur
 
−
**1. Märk önskat antal objektglas. Glöm ej att ta med positiv kontroll.
 
−
**2. Stryk med pipettspetsen ut ca 10 µL av provmaterialet. Gör mycket tunna utstryk.
 
−
**3. Låt preparatet lufttorka.
 
−
**4. Fixera glaset 5 min i metanol.
 
−
**5. Placera glaset i trikromfärg. Låt stå 90 min i rumstemperatur.
 
−
**6. Torka av färgöverskottet på glasets baksida mot en allduk. Tryck försiktigt glasets framsida mot allduken.
 
−
**7. Avfärga i avfärgningslösning (ättikssyra i 90 % etanol) ungefär 5 sek. Låt överskott av vätska rinna av mot allduk mellan varje kyvett.
 
−
**8. Skölj hastigt i 95 % etanol.
 
−
**9. Låt stå i 95 % etanol 5 min.
 
−
**10. Låt stå i 99,5 % etanol 10 min.
 
−
**11. Låt stå i Histoclear 10 min.
 
−
**12. Montera det våta glaset med DPX och täckglas. Låt torka. Förvara glasen skyddade mot ljus.
 
−
 
−
 
−
 
−
==== Granskning av preparat ====
 
−
 
−
Granska 200 synfält med 100x immersionsobjektiv. För morfologiska kriterier hänvisas till avsnittet om microsporidia i denna bok.
 
−
 
−
 
−
=== Kvalitetssäkring ===
 
−
 
−
Positiv kontroll som innehåller formaldehydfixerade microsporidiasporer. Förvaras i kylskåp och behandlas som övriga prov. Lämpligt bildmaterial finns under referens 3 och 4.
 
−
 
−
 
−
=== Referenser ===
 
−
 
−
*1. Ryan NJ, Sutherland G, Coughlan K, Globan M, Doultree, Marshall J, Baird, Pedersen J, Dwyer B. A new trichromeblue stain for detection of microsporidial species in urine, stool, and nasopharyngeal specimens. 1993;31:3264-3269.
 
−
*2. Meridian Diagnostics, Inc. Para-PacTrichrome Blue. Produktinformation.
 
−
*3. Ash L, Orihel C. Atlas of Human Parasitology. ASCP Press, Chicago, fourth edition, 1997.
 
−
*4. Rondamelli EG, Scaglia M. Atlas of human protozoa. Masson 1993.
 
  
 
[[Kategori:Infektioner i mage och tarm]]
 
[[Kategori:Infektioner i mage och tarm]]
 
[[Kategori:Laboratoriediagnostik-parasiter]]
 
[[Kategori:Laboratoriediagnostik-parasiter]]

Nuvarande version från 19 april 2012 kl. 16.05

Till innehållsförteckningen för Referensmetodik: Tarminfektioner, 2:a upplagan 2002

Bilaga 6 A.[redigera]

Mikroskopisk påvisning av cystor och maskägg efter formalin/etylacetat koncentration av feces[redigera]

Se länk PAR 01

Bilaga 6 B.[redigera]

Mikroskopisk påvisning av Cryptosporidium, Cyclospora och Isosporaoocystor efter färgning med modifierad Ziehl-Neelsen[redigera]

Se länk PAR 02

Bilaga 6 C.[redigera]

Mikroskopisk påvisning av trofozoiter efter trikrom-färgning[redigera]

Se länk PAR 03

Bilaga 6 D.[redigera]

Mikroskopisk påvisning av microsporidiasporer efter förstärkt trikromfärgning[redigera]

Se länk PAR 04

Hämtad från "http://referensmetodik.folkhalsomyndigheten.se/index.php?title=Bilaga_6._Parasitologiska_metoder&oldid=10094"