Blododlingssubstrat och tillsatser
Till innehållsförteckningen för Referensmetodik:Bakteriemi-diagnostik
Blododlingssubstrat och tillsatser
Blododlingen kräver ett näringsrikt medium för att möjliggöra snabb växt av ett stort antal arter med varierande näringskrav speciellt vid de låga bakterietal som kan förekomma. Några vid blododling ofta använda agar- och buljongsorter är Brain Heart Infusion, Trypticase Soy Broth, Columbia Broth och supplementerad peptonbuljong samt för anaerober t ex Fastidious Anaerobe Broth.
Mediet förses med tillsatser i syfte att förhindra blodkoagulation, neutralisera serums baktericida effekt och blockera inverkan av antibiotika i blodprovet. Hypertona medier, t ex med tillsats av sackaros, har ibland rekommenderats för cellväggsskadade bakterier och för svamp, men de har inte fått stor användning. För vissa arter tillverkas specialmedier, exempelvis saltfritt medium för Legionella.
I Sverige har traditionellt bifasiska flaskor varit vanliga. De ger med sin kombination av agar och buljong möjlighet att isolera individuella kolonier. Flasktypen är omständlig att tillverka och svår att transportera varför den inte fått stor kommersiell betydelse internationellt, men den ger goda resultat vid prövning. Industriellt tillverkade blododlingsflaskor innehåller oftast enbart buljong, men på senare tid har system utvecklats där en agaryta kan monteras på flaskan efter inokulering.
På den internationella marknaden åsätts flaskorna lång hållbarhetstid, vilket bygger på att en del känsliga tillväxtfaktorer (exempelvis för Haemophilus och Neisseria-arter) förväntas tillföras med blodet.
Funktionskontroll (Appendix 1) är angeläget vid val av medium eller byte av fabrikat eller batch och den bör utföras med sparsamt inokulat eventuellt tillsammans med blod för att efterlikna kliniska förhållanden.
Gasmiljö
Den vanligaste systemvariationen för att tillgodose särskilda krav är anaerobt utförande. Ofta används en blandning av 5 % koldioxid i kväve ibland också H2. På grund av de förhållandevis stora volymerna medium med löst syre nås vanligen inte strikt anaerob miljö. Gasfasförhållandena kompliceras ytterligare när man tillför blod, som dels innehåller bundet syre och dels förbrukar syre efter hand. I vissa system byts gasfasen regelbundet under odlingen.
En god aerob miljö fås i flaskorna om de har en agaryta över buljongen eller med skakodling. Förhöjd koldioxidhalt förekommer också i aeroba flaskor. Vanligen används aerob och anaerob flaska parallellt. Vissa fakultativa anaerober kan ibland återfinnas företrädesvis i det anaeroba mediet (t ex Haemophilus). Svamp kräver aerob miljö.
Tillsatser
Vanligaste tillsatsen för att hämma blodkoagulation och inaktivera komplement är 0,025 - 0,05 % Sodium polyanethol sulphonate (SPS eller Liquoid(Roche)). SPS inaktiverar också ev förekommande aminoglykosidantibiotika. En nackdel är att också vissa stammar bl a Neisseria hämmas av substansen. Denna hämning är beroende på mediets sammansättning i övrigt och den kan ibland motverkas med tillsats av 1% gelatin.
1 % Isovitalex (BBL) är en vanlig tillsats för att gynna bakterieväxten. Vissa streptokockstammar kräver pyridoxal för tillväxt. Pyridoxal saknas i denna vitaminblandning men tillförs normalt i tillräcklig mängd med blodet.
Som tillsats för att frigöra delvis fagocyterade patogener har använts 0,05% saponin t ex i de metoder där man börjar med att lysera blodprovet. Utbytet av svamp ökar men å andra sidan kan känsliga arter t ex Haemophilus hämmas.
För att förhindra att eventuellt pågående antibiotikaterapi hämmar bakterieväxten är den utspädning som inokuleringen innebär viktig. I buljongen blir antibiotikakoncentrationen vanligen lägre än MIC, och bakterierna kan växa ut. Om patienten antibiotikabehandlas är en blodprovsspädning 1:10 att föredra, medan i övrigt en spädning 1:5 har ergonomiska och ekonomiska fördelar. 1 somliga system förekommer en tillsats av jonbytarmassa (resin). Laddade antibiotikamolekyler adsorberas och deras effekt neutraliseras.
Penicillinas är en vanlig tillsats till blododlingsmedier. Effektivast är att separat sätta till 13-laktamas till de odlingar där så är motiverat.Tillsats av.sulfaantagonisten PABA är numera knappast motiverad p g a den minskande sulfaanvändningen.