PAR 05 Anrikning av Strongyloides-larver

Hoppa till: navigering, sök

Huvudartikel, publicerad juni 2012. Texten Àr preliminÀr, Ànnu ej beslutad genom konsensusförfarande.


Till innehÄllsförteckningen för Referensmetodik:Parasitologisk diagnostik


Mikroskopisk pÄvisning av Strongyloides-larver efter anrikning pÄ agar-platta

Indikation

Vid klinisk misstanke om Strongyloides-infektion nÀr koncentrationsmetoden (PAR 01) Àr negativ.

Analysprincip

Larver frÄn fÀrsk feces anrikas pÄ agarplatta. Larverna lÀmnar karakteristiska spÄr pÄ plattan och identifieras dÀrefter till speciesnivÄ genom mikroskopering av avdödat material.

OBS! Med denna anrikningsmetod kan eventuella hakmaskÀgg i provet klÀckas och larver utvecklas. För att utesluta hakmask-infektion rekommenderas dÀrför att Àven koncentrationsmetod för cystor och maskÀgg (PAR 01) utförs pÄ prov dÀr Strongyloides-anrikning begÀrts.

Provtagning och transport

5-10 gram fÀrsk feces rekommenderas. För optimalt utbyte bör feces tas om hand sÄ snabbt som möjligt efter provtagning. Om provet ska skickas till annat laboratorium mÄste det analyseras inom 1 dygn. Feces förvaras i rumstemperatur i avvaktan pÄ analys samt under transport eftersom larvernas viabilitet pÄverkas av lÄg temperatur.

Speciell utrustning

Inverterat mikroskop

Material

Parafilm

Reagenser

  • Agarplatta (blir ganska genomskinlig, vilket underlĂ€ttar avlĂ€sning)
agar 1,5 %
köttextrakt 0,5 %
pepton 1,0 %
Na Cl 0,5 %
  • NaCl 0,9 %
  • formaldehyd 3,7 %

Analysprocedur

Iaktta försiktighet. AnvÀnd alltid handskar vid arbete med levande Strongyloides-larver.

  1. Rör ut cirka 3 gram fÀrsk feces med fysiologisk NaCl sÄ att konsistensen blir krÀmig. Feces med lös konsistens behöver inte tunnas ut.
  2. Placera provet i mitten pÄ agarplattan och bred ut sÄ att det blir ungefÀr som en enkronas storlek i diameter.
  3. SÀtt pÄ locket och förslut med en remsa av parafilm. Förvara plattan i inkubator med en temperatur mellan 30 °C till 32 °C. Undvik direkt solljus.
  4. Granska plattan dagligen i inverterat mikroskop för att se om larverna lÀmnat spÄr. Typiska spÄr för Strongyloides-larver finns avbildade i referens 1.
  5. Om spĂ„r ses öppnas plattan försiktigt. Skölj försiktigt ytan med 3,7 % formaldehyd (10 % formalin). LĂ„t stĂ„ 30 minuter för avdödning. Sug upp vĂ€tskan med en plastpasteur-pipett och överför till ett centrifugrör. OBS! Arbetet utförs i dragskĂ„p.
  6. Centrifugera den uppsugna vÀtskan i 500 x g 5 minuter.
  7. Om inga spÄr ses efter 3 dagar avslutas inkubationen. FortsÀtt dÀrefter enligt punkt 5 och 6.

Bedömning av sediment

Sug av ovanvÀtskan och tag med en pipett upp en del av sedimentet som placeras pÄ ett objektsglas.

Kontrollera ”svanspartiet” pĂ„ eventuella maskar i mikroskop med objektiv 40x. Filariforma larver av Strongyloides stercoralis har kluven svans i motsats till filariforma larver av hakmask.

FortsÀtt att granska hela sedimentet.

För specifik artbestĂ€mning och differentiering frĂ„n hakmasklarver se referens 1 och 2, samt i artikel ”Strongyloides stercoralis”. Hakmask-larver (som klĂ€cks frĂ„n Ă€gg i provet) kan ses redan dag 1, men största antalet kommer först efter 5 dagar (nĂ€r inkubationen redan Ă€r avslutad). Dessa larver lĂ€mnar annorlunda spĂ„r.

SĂ€kerhetsaspekter

OBS! Iaktta stor försiktighet vid hantering av plattor med anrikat material, eftersom metoden leder till att infektiösa, filariforma larver av Strongyloides utvecklas.

Svarsrutiner

Positivt prov: Rhabditiforma/filariforma larver av Strongyloides stercoralis pÄvisade

Negativt prov: Inga larver pÄvisade

AnmÀrkning

Vid stark klinisk misstanke om Strongyloides-infektion och negativ isolering, exempelvis oklar eosinofili hos patient som varit i endemiskt omrÄde, rekommenderas att analysen upprepas pÄ nytt prov.

Denna metod kan Àven anvÀndas för anrikning av hakmasklarver. Inkubering och daglig granskning skall dÄ pÄgÄ under minst en vecka.

KvalitetssÀkring

Avdödade larver av Strongyloides stercoralis ingÄr i UK-NEQAS feces-utskick.

Prestanda

Metoden har högre kÀnslighet Àn koncentrationsmetoden (cystor och maskÀgg) och rekommenderas vid lÄg utsöndring av larver.

Referenser

  1. Ines Ede J, Souza JN, Santos RC, Souza ES, Santos FL, Silva ML, Silva MP,Teixeira MC, Soares NM. Efficacy of parasitological methods for the diagnosis of Strongyloides stercoralis and hookworm in faecal specimens. Acta Trop. 2011 Dec;120(3):206-10.
  2. Ash L, Orihel T. Atlas of Human Parasitology. ASCP Press, Chicago
  3. Garcia LS. Diagnostic Medical Parasitology, fifth edition, ASM Press, Washington D.C.