Chancroid-laboratoriediagnostik

Huvudsida: Chancroid (alt. beteckningar ulcus molle eller mjuk schanker)

Chancroid - Haemophilus ducreyi

Allmänt

Odling är referensmetod för påvisande av H. ducreyi. Bakterien är känslig och det är viktigt med snabb transport till laboratoriet inför odling. Den kan växa på vanliga odlingsmedier som GC-agar, men optimal växt kräver specialsubstrat. PCR-metoder finns utvecklade, men är inte kommersiellt tillgängliga. Serologi har låg känslighet och används inte för rutindiagnostik. I gramfärgat direktutstryk kan ofta typiskt anordnade gramnegativa kockoida stavar identifieras.

Referensmetodik

Odling

Odling är referensmetod.

Referenssubstrat GLV-3-agar med vankomycin 3 mg/L (bilaga 6). Tillsatt fetalt kalvserum kan ge ökat utbyte.

Primärisolering: Pinnprov inokuleras på GLV-3-agar och icke selektiv GC-agar. Inkubering i 33-35 ºC med 5 % CO₂ och hög fuktighet. Viktigt att temperaturen inte överstiger 35 ºC. Inkuberas i tre dygn.

Identifiering och minimikriterier

Presumtiv diagnos: Misstänkta kolonier är gul-grå, välvda och granulerade, ibland med alfa-hemolys. Kolonin kan förskjutas intakt över agarytan och varierar i storlek, vilket ofta ger falskt intryck av blandflora.

Definitiv diagnos: Gramnegativa korta stavar i typisk anordning, oxidaspositiva, katalasnegativa, nitratreducerande. X-faktorkrav kan bäst demonstreras med porfyrintest enligt Kilian (2) och PCR.

Alternativa diagnostiska metoder

Nukleinsyrabaserade metoder finns utvecklade av bland annat Roche (multiplex PCR för H. ducreyi, T. pallidum och HSV). Metoden är sannolikt känsligare än odling, men finns ännu ej kommeriellt tillgänglig.

Serologi. Humoralt immunsvar har påvisats hos patienter med chancroid och serologiska tester baserade på renade eller rekombinanta antigen (yttre membranproteiner och LOS) finns. Problem föreligger dock med korsreaktivitet mot andra Haemophilus-arter. Testerna har begränsat värde vid primärdiagnostiken men kan användas för epidemiologiska studier. Känsligheten varierar 55-100 % (1).

Resistensbestämning

Referensmetod och referensmedium för resistensbestämning saknas för närvarande. Antibiotikaresistens har studerats mest med agarspädningsmetod, men diskdiffusionsmetoder har också använts. I referenslaboratorier har diskdiffusionsmetod och Etest utförts på anrikad gc-resistensplatta med relativt bra resultat.

Epidemiologisk typning

Ingen rutinmässig typning utförs.

Kvalitetskontroll

Referensstammar: CCUG 7470 (CIP 76118; ATCC 35000) (toxinproducerande) och CCUG 4438 (CIP 542; ATCC 33940) (ej toxinproducerande).

Laboratorierapportering

H. ducreyi är inte anmälningspliktig enligt smittskyddslagen.

Speciallaboratorium

Bakteriologiska laboratoriet, Guldhedsgatan 10A, 413 46 Göteborg.

REFERENSER

1. Elkins, C., Kyunjgcheol, Y., Olsen, B., Thomas,C., Morse, S. 2000. Development of a serological test for H. ducreyi for seroprevalence studies. J. Clin. Microbiol 38:1520-6.

2. Kilian, M. 1974. A rapid method for the differentiation of Haemophilus strains. The porphyrin test. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sect B 82:835-842.