Provtagning och transport

Hoppa till: navigering, sök

Huvudartikel, reviderad juni 2012.


Till innehÄllsförteckngen för Referensmetodik:Parasitologisk diagnostik och Tarminfektioner


Transport och provtagningsföreskrifter vid parasitologisk undersökning

Se ocksĂ„ ”Provtagning och transport” i respektive kapitel.

1. Feces

Figur 1.Förekomst av cystor och/eller trofozoiter i relation till feces-konsistens.Foto: Dpdx, CDC

Parasitstadier

Vid intestinala parasitinfektioner kan olika utvecklingsstadier pÄvisas i feces. MaskÀgg, cystor och oocystor (som vanligen pÄvisas i koncentrationsprov) har vanligtvis bra hÄllbarhet under transport, oavsett om de Àr fixerade eller ej. Trofozoiter, som kan vara den dominerande formen vid E. histolytica- och G. intestinalis-infektion med kraftig diarré, krÀver antingen att provet fixeras i anslutning till provtagningen eller att mikroskopin utförs snarast efter provtagning. Enligt figur 1. framgÄr att cyststadiet blir vanligare och trofozoiterna försvinner allteftersom avföringen blir fastare. Detta Àr av betydelse bÄde för metodval och för eventuell fixering av feces.

HĂ„llbarhet

Generellt gÄr det inte att ange exakta hÄllbarhetstider, men utbytet blir i vissa fall sÀmre med tiden, t.ex. vid koncentrering av Giardia-cystor. DÀrför rekommenderas ett snabbt omhÀndertagande Àven av fixerat provmaterial bÄde för morfologi och för DNA-extraktion.

Antal prov

DÄ mÄnga parasiter utsöndras intermittent rekommenderas upprepad provtagning vid kvarvarande kliniska besvÀr. Ett schema med anvisningar rörande val av undersökningsmetod, provmaterial och rekommenderat antal prov finns. Intag av koltabletter och röntgenkontrastmedel kan försvÄra bedömningen av sÄvÀl fixerad som fÀrsk feces och bör undvikas innan provtagning.

Val av transportmedium

Formalin har traditionellt anvÀnts som transportmedium för fecesparasiter, men rekommenderas inte lÀngre dÄ det varken Àr lÀmpligt för trofozoitpÄvisning eller PCR. För jÀmförelse av olika material och metoder se tabell. DÄ rutinerna kan variera mellan olika laboratorier bör man alltid ta reda pÄ vilka föreskrifter som gÀller lokalt.

Alternativ 1.

SAF-fixativ (sodium acetate- acetic acid-formalin) rekommenderas som transportmedium för feces nÀr mikroskopisk undersökning önskas. Alla utvecklingsstadier inklusive trofozoiter av Dientamoeba fragilis kan detekteras. Rekommenderas inte för PCR.

Alternativ 2.

Obehandlad feces rekommenderas nÀr man önskar utföra mikroskopi och PCR pÄ samma material. "FÀrskprov" för pÄvisning av trofozoiter samt prov för isolering av Strongyloides -larver bör undersökas snarast möjligt efter provtagning.

OBS! En kombination av provtagningsalternativ 1 och 2 ger förutsÀttningar för optimal diagnostik. Etanolfixering rekommenderas för PCR-undersökning vid kraftig diarré med misstanke om förekomst av trofozoiter (frÀmst Entamoeba histolytica). Observera att materialet Àr olÀmpligt för mikroskopi.

Provtagningsinstruktioner och transport

ProvtagningskÀrl med sked samt passande ytterhylsa anvÀnds.

Feces uppsamlas frĂ„n blöja eller ren toalettstol dĂ€r man lagt flera lager av toalettpapper. Det Ă€r viktigt att avföringen inte blandas med urin eller vatten frĂ„n toalettstolen. Vid mycket lös avföring Ă€r det bĂ€ttre att anvĂ€nda ett engĂ„ngskĂ€rl, t.ex. en pappersrondskĂ„l. En till tre skedar (mĂ€ngden Ă€r beroende av provtagningskĂ€rl – se lokala anvisningar) feces, taget med skeden som sitter i locket, förs ned i provtagningskĂ€rlet. Om feces innehĂ„ller blodiga eller slemmiga partier tas prov Ă€ven frĂ„n dessa stĂ€llen. Om provtagningskĂ€rlet innehĂ„ller SAF eller etanol skall feces blandas mycket noggrant med fixativet. Locket skruvas till omsorgsfullt, varefter provtagningskĂ€rlet mĂ€rks med namn, personnummer samt avsĂ€ndare och provtagningsdatum. DĂ€refter förs provtagningskĂ€rlet ned i ytterhylsan. Provet lĂ€ggs i kuvert godkĂ€nt för posttransport av biologiskt material och sĂ€nds med vanlig postgĂ„ng.

Observera att det Àr viktigt att patienten fÄr tillgÄng till utförliga lokala provtagningsinstruktioner.

"FÀrskprov" för pÄvisning av trofozoiter samt prov för isolering av Strongyloides- larver bör undersökas snarast möjligt efter provtagning.

"Tejpprov" för pĂ„visning av springmask – för provtagning se kapitel Enterobius vermicularis.

2. Urin för pÄvisning av Schistosoma-Àgg

KÀnsligheten av mikroskopisk pÄvisning av Schistosoma spp.-Àgg ökar med provvolymen.

Urin bör uppsamlas dagtid under 4 timmar, lĂ€mpligen mellan klockan 10–14, dĂ„ Ă€ggutsöndringen Ă€r störst. Det Ă€r Ă€ven möjligt att undersöka en dygnsvolym urin.

OBS! Det Ă€r inte tillförlitligt att endast undersöka 10 mL urin dĂ„ sensitiviteten blir lĂ„g. Vid negativt undersökningsresultat av ≀ 10 mL urin rekommenderas ny provtagning.

Förvaring och transport

Urin samlas i ett rent kĂ€rl eller rör med tĂ€t förslutning. Undersökning av urinprov avseende Schistosoma-Ă€gg bör utföras sĂ„ snabbt som möjlig, helst samma dag som provet tagits. Om transporttiden förvĂ€ntas överstiga 1 dygn kan man sĂ€tta till 1–2 mL 10 % formalin per 100 mL urin för att förhindra bakterietillvĂ€xt och klĂ€ckning av Ă€gg. ProvtagningsbehĂ„llare med urin lĂ€ggs i ytterhylsa (rör) eller i en ask med tĂ€tt lock (större provtagningskĂ€rl) och packas för posttransport av biologiskt material. Provet sĂ€nds med vanlig postgĂ„ng.

3. Prov för serologiska undersökningar

Blod utan tillsatser, serum, plasma eller cerebrospinalvÀtska kan anvÀndas. Serum bör avskiljas innan transport. I allmÀnhet rekommenderas ett par mL serum utan tillsats men med modern teknik klarar man sig vanligen med betydligt mindre volymer.

Transport

Provrör innehÄllande material för parasitologisk undersökning lÀggs i ytterhylsa samt kuvert godkÀnt för posttransport av biologiskt material och sÀnds med vanlig postgÄng.


4. Material för mikroskopisk pÄvisning av parasiter i blod och vÀvnad

EDTA-blod i rör, tjock droppe och/eller blodutstryk pÄ glas, imprint pÄ glas frÄn vÀvnadsbiopsi,utstryk frÄn sÄr, ögonskrap, etc. Preparat pÄ glas bör lufttorkas och packas i transporthylsa.

För specifika krav vid provtagning se ”Provtagning och transport” i respektive kapitel.

"Skin snip" för pĂ„visning av O. volvulus – för provtagning se PAR 07


4.1.Blod och vÀvnadsprov för direkt pÄvisning av Leishmania

Hudlesion

VĂ€lj den lesion som Ă€r mest ”aktiv”. TvĂ€tta först lesionen sĂ„ kraftigt som det gĂ„r med tvĂ„l och vatten för att fĂ„ bort allt dött material, och för att exponera huden. Desinfektera sedan med 70 % alkohol. Om lokalanestesi skall göras injiceras sĂ„ liten mĂ€ngd som möjligt djupt under lesionen. Höga koncentrationer av lokalanalgetika kan ha hĂ€mmande effekt pĂ„ parasit-tillvĂ€xten i odling. Om RPMI-transportmedium inte finns kan provmaterialet lĂ€ggas i ett rör fyllt med steril fysiologisk koksaltlösning (0,9 % NaCl). VĂ€lj ett av nedanstĂ„ende alternativ:

Med skalpell

Provmaterial tas sterilt frĂ„n botten av sĂ„ret samt frĂ„n sĂ„rkanten. Överförmaterialet till RPMI-transportmedium. Flera hudbitar kan lĂ€ggas i samma rör. Sist görs flera utstryk av materialet pĂ„ objektglas.

Hudstans

Överför en hudstans sterilt till RPMI-transportmedium. Sist görs utstryk frĂ„n material som skrapats med skalpell frĂ„n botten av sĂ„ret samt frĂ„n sĂ„rkanten.

FinnÄlsbiopsi

Dra upp 0,1 mL steril fysiologisk koksaltlösning i en spruta och spruta in vÀtskan parallellt med sÄrkanten frÄn utsidan. Rotera nÄlen flera gÄnger, aspirera vÀtskan och spruta ner i RPMI-transportmedium. Arbeta sÄ sterilt som möjligt. Sist görs flera utstryk av materialet frÄn nÄlen pÄ objektglas.

BenmÀrg

Material frÄn benmÀrg överförs sterilt direkt i RPMI-transportmedium med tillsatt EDTA alternativt i ett EDTA-rör. Gör flera utstryk pÄ objektglas med kvarvarande material i nÄlen.

Biopsi/aspirat frÄn lever, mjÀlte, lymfkörtel eller annan vÀvnad

Material överförs sterilt direkt i RPMI-transportmedium. Sist görs flera utstryk pĂ„ objektglas. Om RPMI-transportmedium inte finns kan provmaterialet lĂ€ggas i ett rör fyllt med steril fysiologisk koksaltlösning (0,9 % NaCl).

Förvaring och transport

Utstryk pÄ objektglas för mikroskopi:

LÄt torka och lÀgg dÀrefter i transporthylsa. Förvaras i rumstemperatur.

Biopsimaterial för odling:

LÀgg provmaterial i RPMI-transportmedium(steril provtagning). Det Àr viktigt att materialet ej torkar in, fyll röret med medium. Förvaring i rumstemperatur i avvaktan pÄ transport (vid behov, Àven över natt). Materialet fÄr ej frysas.

EDTA-blod och benmÀrg i EDTA-rör för odling

Förvaras i rumstemperatur i avvaktan pÄ transport.

Material för PCR i fysiologisk koksaltlösning

Förvaras i kylskÄp i avvaktan pÄ transport. Transporteras i rumstemperatur. PÄ grund av risk för DNA-nedbrytning med nukleaser i organisk vÀvnad Àr det bÀttre ju kortare transporttiden Àr.

EDTA-blod och benmÀrg i EDTA-rör för PCR

Förvaras i kylskÄp i avvaktan pÄ transport. Transporteras i rumstemperatur.

5. Prov för odling/anrikning

Se "Provtagning och transport" i respektive kapitel.

6. Remiss

Till provet som Ă€r mĂ€rkt med personuppgifter bifogas en separat förpackad remiss med uppgifter om patientdata, avsĂ€ndare, provtagningsdatum, provmaterial samt önskad undersökning. PĂ„ remissen skall Ă€ven anges utlandsresor, misstĂ€nkt infektionsdatum samt misstĂ€nkt smittkĂ€lla. Även preliminĂ€ra resultat frĂ„n avsĂ€ndande laboratorium bör anges pĂ„ remissen.